דלקת מפרקים ניוונית (OA) היא אחת ממחלות מפרקי העצם הניווניות הכרוניות ארוכות הטווח הפוגעות באוכלוסייה בגיל מעל 65.
1]. בדרך כלל, חולי OA מאובחנים עם סחוס פגום, סינוביום דלקתי וכונדרוציטים שחוקים, המעוררים כאב ומצוקה גופנית.
2]. כאבי פרקים נגרמים בעיקר מניוון של סחוס במפרקים על ידי דלקת, וכאשר הסחוס ניזוק קשות עצמות עלולות להתנגש זו בזו ולגרום לכאב בלתי נסבל ולקושי פיזי [
3]. מעורבותם של מתווכים דלקתיים עם תסמינים כמו כאב, נפיחות ונוקשות של המפרק מתועדת היטב. בחולי OA, ציטוקינים דלקתיים, הגורמים לשחיקת הסחוס והעצם התת-כונדרלית נמצאים בנוזל הסינוביאלי [
4]. שתי תלונות עיקריות שיש לחולי OA בדרך כלל הן כאב ודלקת סינוביאלית. לכן המטרות העיקריות של טיפולי OA הנוכחיים הן להוריד כאב ודלקת. [
5]. למרות שלטיפולי OA הזמינים, כולל תרופות לא סטרואידיות וסטרואידיות, יש יעילות מוכחת בהקלה על כאבים ודלקות, לשימוש ארוך הטווח של תרופות אלו יש השלכות בריאותיות חמורות כגון הפרעות קרדיווסקולריות, מערכת העיכול והכליות [
6]. לפיכך, יש לפתח תרופה יעילה יותר עם פחות תופעות לוואי לטיפול באוסטאוארתריטיס.
מוצרי בריאות טבעיים הופכים פופולריים יותר ויותר בשל היותם בטוחים וזמינים בקלות [
7]. לתרופות קוריאניות מסורתיות יש יעילות מוכחת נגד מספר מחלות דלקתיות, כולל דלקת פרקים [
8]. אוקלנדיה לאפה DC. ידוע בסגולותיו הרפואיות, כגון הגברת זרימת הצ'י לשיכוך כאבים והרגעת הקיבה, ושימש באופן מסורתי כמשכך כאבים טבעי [
9]. דיווחים קודמים מצביעים על כך שא.לאפה הוא בעל אנטי דלקתי [
10,
11], משכך כאבים [
12], אנטי סרטן [
13], ומגן על קיבה [
14] אפקטים. הפעילויות הביולוגיות השונות של A. lappa נגרמות על ידי התרכובות הפעילות העיקריות שלו: קוסטונוליד, דהידרוקוסטוס לקטון, דיהידרוקוסטונוליד, קוסטוסלקטון, α-קוסטול, לקטון סוזוריאה וקוסטוסלקטון [
15]. מחקרים קודמים טוענים שקוסטונוליד הראה תכונות אנטי דלקתיות בליפופוליסכריד (LPS), אשר גרמה למקרופאגים באמצעות ויסות NF-kB ומסלול חלבון הלם חום [
16,
17]. עם זאת, אף מחקר לא חקר את הפעילויות הפוטנציאליות של A. lapa לטיפול ב-OA. המחקר הנוכחי חקר את ההשפעות הטיפוליות של A. lappa נגד OA באמצעות (מונוסודיום-יודואצטט) MIA ומודלים של מכרסמים המושרים על ידי חומצה אצטית.
מונוסודיום-יודואצטט (MIA) נמצא בשימוש מפורסם לייצור חלק גדול מהתנהגויות הכאב והמאפיינים הפתופיזיולוגיים של OA בבעלי חיים [
18,
19,
20]. כאשר מוזרק למפרקי הברך, MIA מבלבל את חילוף החומרים של הכונדרוציטים ומעורר דלקת ותסמינים דלקתיים, כגון סחוס ושחיקת עצם תת-כונדרלית, התסמינים הקרדינליים של OA.
18]. תגובת התפתלות הנגרמת עם חומצה אצטית נחשבת כסימולציה של כאב היקפי בבעלי חיים שבהם ניתן למדוד כמותית את הכאב הדלקתי [
19]. קו תאי מקרופאג עכברים, RAW264.7, משמש בדרך כלל לחקר התגובות התאיות לדלקת. עם הפעלה עם LPS, מקרופאגים RAW264 מפעילים מסלולים דלקתיים ומפרישים מספר מתווכים דלקתיים, כמו TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS ו-IL-6 [
20]. מחקר זה העריך את ההשפעות האנטי-נוציספטיביות והאנטי-דלקתיות של A. lappa כנגד OA במודל החיות של MIA, מודל החיות המושרה על ידי חומצה אצטית ותאי RAW264.7 המופעלים על ידי LPS.
2. חומרים ושיטות
2.1. חומר צמחי
השורש המיובש של A. lapa DC. ששימש בניסוי נרכש מ-Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (סיאול, קוריאה). הוא זוהה על ידי פרופ' דונגון לי, המחלקה לפרמקולוגיה צמחית, קול"מ לרפואה קוריאנית, אוניברסיטת גאצ'ון, ומספר דגימת השובר הופקד כ-18060301.
2.2. ניתוח HPLC של תמצית A. lapa
א.לאפה חולצה באמצעות מכשיר ריפלוקס (מים מזוקקים, 3 שעות ב-100 מעלות צלזיוס). התמיסה שחולצה עברה סינון ועיבוי באמצעות מאייד בלחץ נמוך. לתמצית A. lapa הייתה תשואה של 44.69% לאחר ייבוש בהקפאה מתחת ל-80 מעלות צלזיוס. ניתוח כרומטוגרפי של A. lapa נערך עם HPLC המחובר באמצעות מערכת 1260 InfinityⅡ HPLC (Agilent, Pal Alto, CA, ארה"ב). להפרדה כרומטית, נעשה שימוש בעמודה EclipseXDB C18 (4.6 × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר, Agilent) ב-35 מעלות צלזיוס. סה"כ 100 מ"ג מהדגימה הודללו ב-10 מ"ל של 50% מתנול ועברו צלילים למשך 10 דקות. דגימות סוננו עם מסנן מזרק (Waters Corp., Milford, MA, ארה"ב) של 0.45 מיקרומטר. הרכב הפאזה הניידת היה 0.1% חומצה זרחתית (A) ואצטוניטריל (B) והעמודה נפלטה באופן הבא: 0-60 דקות, 0%; 60–65 דקות, 100%; 65–67 דקות, 100%; 67–72 דקות, 0% ממס B עם קצב זרימה של 1.0 מ"ל לדקה. הקולחים נצפו ב-210 ננומטר תוך שימוש בנפח הזרקה של 10 μL. הניתוח בוצע בשלושה עותקים.
2.3. דיור וניהול בעלי חיים
חולדות זכר Sprague-Dawley (SD) בני 5 שבועות ועכברי ICR זכרים בני 6 שבועות נרכשו מ- Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, קוריאה). בעלי חיים הוחזקו בחדר באמצעות טמפרטורה קבועה (22 ± 2 מעלות צלזיוס) ולחות (55 ± 10%) ומחזור אור/חושך של 12/12 שעות. החיות הכירו את המצב במשך יותר משבוע לפני תחילת הניסוי. לבעלי חיים הייתה אספקה אד ליביטום של מזון ומים. הכללים האתיים הנוכחיים לטיפול וטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת גאצ'ון (GIACUC-R2019003) קוימו בקפדנות בכל ההליכים הניסויים בבעלי חיים. המחקר תוכנן ניסוי עיוור חוקר ומקביל. נקטנו בשיטת המתת חסד לפי הנחיות ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים.
2.4. MIA הזרקה וטיפול
חולדות הופרדו באופן אקראי ל-4 קבוצות, כלומר דמה, בקרה, אינדומתצין וא.לאפה. לאחר שהורדמו בתערובת של 2% איזופלוראן O2, החולדות הוזרקו באמצעות 50 μL של MIA (40 מ"ג/מ"ר; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ארה"ב) תוך מפרקית למפרקי הברך כדי להוביל ל-OA ניסיוני. הטיפולים נערכו כדלקמן: קבוצות בקרה ודמויות נשמרו רק עם תזונה בסיסית של AIN-93G. רק, קבוצת אינדומתצין סופקה עם אינדומתצין (3 מ"ג/ק"ג) ששולב בתזונה AIN-93G וקבוצת A. lappa 300 מ"ג/ק"ג הוקצתה לתזונה AIN-93G בתוספת A. lappa (300 מ"ג/ק"ג). הטיפולים נמשכו במשך 24 ימים מיום השראת OA בשיעור של 15-17 גרם לכל 190-210 גרם משקל גוף על בסיס יומי.
2.5. מדידת נושא משקל
לאחר אינדוקציה של OA, מדידת יכולת נשיאת משקל של הגפיים האחוריות של החולדות בוצעה עם ה-Incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, ארה"ב) כמתוכנן. חלוקת המשקל על הגפיים האחוריות חושבה: יכולת נשיאת משקל (%)
