דלקת מפרקים ניוונית (OA) היא אחת ממחלות העצם והמפרקים הכרוניות הניווניות ארוכות הטווח, הפוגעות באוכלוסייה מעל גיל 65 [
1באופן כללי, חולי OA מאובחנים עם סחוס פגום, סינוביום מודלק, וכונדרוציטים נשחקים, אשר גורמים לכאב ומצוקה פיזית [
2כאבי דלקת פרקים נגרמים בעיקר כתוצאה מניוון הסחוס במפרקים כתוצאה מדלקת, וכאשר הסחוס ניזוק קשות עצמות יכולות להתנגש זו בזו ולגרום לכאב בלתי נסבל ולקשיים פיזיים.
3מעורבותם של מתווכים דלקתיים בתסמינים כגון כאב, נפיחות ונוקשות של המפרק מתועדת היטב. בחולי OA, ציטוקינים דלקתיים, הגורמים לשחיקה של הסחוס ועצם תת-סחוסית, נמצאים בנוזל הסינוביאלי [
4שתי תלונות עיקריות שחולי OA סובלים בדרך כלל מכאב ודלקת סינוביאלית. לכן, המטרות העיקריות של טיפולי OA הנוכחיים הן להפחית כאב ודלקת.
5למרות שטיפולי OA הזמינים, כולל תרופות לא סטרואידיות וסטרואידיות, הוכחו כיעילים בהקלה על כאב ודלקת, לשימוש ארוך טווח בתרופות אלו יש השלכות בריאותיות חמורות, כגון תפקוד לקוי של הלב וכלי הדם, מערכת העיכול והכליות.
6לכן, יש לפתח תרופה יעילה יותר עם פחות תופעות לוואי לטיפול באוסטאוארתריטיס.
מוצרי בריאות טבעיים הופכים פופולריים יותר ויותר בשל בטיחותם וזמינים בקלות [
7תרופות קוריאניות מסורתיות הוכחו כיעילותן כנגד מספר מחלות דלקתיות, כולל דלקת פרקים [
8]. צמח אוקלנדיה לפה DC ידוע בתכונותיו הרפואיות, כגון שיפור זרימת הצ'י להקלה על כאבים והרגעת הקיבה, והוא שימש באופן מסורתי כמשכך כאבים טבעי [
9דיווחים קודמים מצביעים על כך של-A. lappa יש תכונות אנטי דלקתיות [
10,
11], משכך כאבים [
12], נוגד סרטן [
13], ומגן גסטרו-פרוטקטיבי [
14] השפעות. הפעילויות הביולוגיות השונות של A. lappa נגרמות על ידי התרכובות הפעילות העיקריות שלו: קוסטונוליד, דהידרוקוסטוס לקטון, דיהידרוקוסטונוליד, קוסטולקטון, α-קוסטול, סוסוריאה לקטון וקוסטולקטון [
15מחקרים קודמים טוענים כי קוסטונוליד הראה תכונות אנטי דלקתיות בליפופוליסכריד (LPS), אשר גרמו למקרופאגים באמצעות ויסות NF-kB ומסלול חלבון הלם חום [
16,
17]. עם זאת, אף מחקר לא חקר את הפעילות הפוטנציאלית של A. lappa לטיפול באוסטאוארתריטיס. המחקר הנוכחי חקר את ההשפעות הטיפוליות של A. lappa כנגד OA באמצעות מודלים של מכרסמים המושרים על ידי (מונוסודיום-יודואצטט) MIA וחומצה אצטית.
מונוסודיום-יודואצטט (MIA) משמש באופן מפורסם ליצירת חלק ניכר מהתנהגויות הכאב והמאפיינים הפתופיזיולוגיים של OA בבעלי חיים [
18,
19,
20כאשר מוזרק למפרקי הברך, MIA משבש את חילוף החומרים של הכונדרוציטים וגורם לדלקת ותסמינים דלקתיים, כגון שחיקת סחוס ועצם תת-סחוסית, התסמינים העיקריים של OA [
18תגובה פיתול המושרת על ידי חומצה אצטית נחשבת באופן נרחב כסימולציה של כאב היקפי בבעלי חיים, כאשר ניתן למדוד כמותית את הכאב הדלקתי [
19קו תאי מקרופאג'ים של עכבר, RAW264.7, משמש בדרך כלל לחקר התגובות התאיות לדלקת. לאחר הפעלתם עם LPS, מקרופאגים מסוג RAW264 מפעילים מסלולי דלקת ומפרישים מספר מתווכים דלקתיים, כגון TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS ו-IL-6 [
20מחקר זה העריך את ההשפעות האנטי-נוסיצפטיביות והאנטי-דלקתיות של A. lappa כנגד OA במודל חיה MIA, מודל חיה מושרה על ידי חומצה אצטית, ותאי RAW264.7 המופעלים על ידי LPS.
2. חומרים ושיטות
2.1. חומר צמחי
השורש המיובש של צמח A. lappa DC. ששימש בניסוי נרכש מחברת Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (סיאול, קוריאה). הוא זוהה על ידי פרופ' דונגון לי, מהמחלקה לפרמקולוגיה של צמחי מרפא, סגן הרפואה הקוריאנית, אוניברסיטת גאצ'ון, ומספר הדגימה של השובר הופקד כ-18060301.
2.2. ניתוח HPLC של תמצית A. lappa
A. lappa חולץ באמצעות מנגנון ריפלוקס (מים מזוקקים, 3 שעות ב-100 מעלות צלזיוס). התמיסה שחולצה סוננה ועיבדה באמצעות מאייד בלחץ נמוך. לתמצית A. lappa הייתה תשואה של 44.69% לאחר ייבוש בהקפאה מתחת ל-80 מעלות צלזיוס. ניתוח כרומטוגרפי של A. lappa נערך באמצעות HPLC המחובר למערכת HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). להפרדה כרומטוגרפית, נעשה שימוש בעמודה EclipseXDB C18 (4.6 × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר, Agilent) ב-35 מעלות צלזיוס. סך של 100 מ"ג מהדגימה דוללו ב-10 מ"ל של 50% מתנול ועברו סוניקציה במשך 10 דקות. הדגימות סוננו באמצעות מסנן מזרק (Waters Corp., Milford, MA, USA) של 0.45 מיקרומטר. הרכב הפאזה הניידת היה 0.1% חומצה זרחתית (A) ואצטוניטריל (B) והעמודה עברה אלציה כדלקמן: 0-60 דקות, 0%; 60-65 דקות, 100%; 65-67 דקות, 100%; 67-72 דקות, 0% ממס B עם קצב זרימה של 1.0 מ"ל/דקה. השפכים נצפו ב-210 ננומטר באמצעות נפח הזרקה של 10 מיקרוליטר. הניתוח בוצע בשלושה עותקים.
2.3. דיור וניהול בעלי חיים
חולדות זכר מדגם Sprague-Dawley (SD) בנות 5 שבועות ועכברי ICR זכרים בני 6 שבועות נרכשו מחברת Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, קוריאה). בעלי החיים הוחזקו בחדר עם טמפרטורה קבועה (22 ± 2 מעלות צלזיוס) ולחות (55 ± 10%) ומחזור אור/חושך של 12/12 שעות. בעלי החיים עברו היכרות עם המצב במשך יותר משבוע לפני תחילת הניסוי. בעלי החיים קיבלו אספקה חופשית של מזון ומים. כללי האתיקה הנוכחיים לטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת Gachon (GIACUC-R2019003) ננקטו בקפדנות בכל הליכי הניסוי בבעלי חיים. המחקר תוכנן כניסוי מקביל ללא חוקר. פעלנו לפי שיטת המתת חסד בהתאם להנחיות ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים.
2.4. הזרקה וטיפול ב-MIA
חולדות חולקו באופן אקראי ל-4 קבוצות: דמה, ביקורת, אינדומטצין ו-A. lappa. לאחר שהורדמו בתערובת איזופלואוראן O2 של 2%, הוזרקו לחולדות 50 מיקרוליטר של MIA (40 מ"ג/מ"ר; Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב) תוך-מפרקי למפרקי הברך כדי להוביל ל-OA ניסיוני. הטיפולים נערכו כדלקמן: קבוצות הביקורת והדמה קיבלו רק את התזונה הבסיסית AIN-93G. רק קבוצת האינדומאטצין קיבלה אינדומטצין (3 מ"ג/ק"ג) ששולבה בתזונה של AIN-93G וקבוצת A. lappa 300 מ"ג/ק"ג הוקצתה לתזונה של AIN-93G בתוספת A. lappa (300 מ"ג/ק"ג). הטיפולים נמשכו במשך 24 ימים מיום אינדוקציה של OA בקצב של 15-17 גרם לכל 190-210 גרם משקל גוף על בסיס יומי.
2.5. מדידת נשיאת משקל
לאחר אינדוקציה של OA, בוצעה מדידת כושר נשיאת משקל בגפיים האחוריות של החולדות באמצעות מכשיר incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) כמתוכנן. התפלגות המשקל בגפיים האחוריות חושבה: כושר נשיאת משקל (%)
