מפעל מוצרים | יצרנים וספקים של מוצרי סין

שמן חוחובה אורגני בכבישה קרה שמן נשא זרעי חוחובה לעיסוי טיפוח העור

המרכיבים העיקריים של שמן חוחובה טבעי הם חומצה פלמיטית, חומצה ארוסית, חומצה אוליאית וחומצה גדולה. שמן חוחובה עשיר גם בויטמינים כמו ויטמין E וקומפלקס ויטמין B.
שעווה הצמח הנוזלית של צמח החוחובה היא בצבע זהוב. לשמן צמחי חוחובה ניחוח אגוזי אופייני ומהווה תוספת מועדפת למוצרי טיפוח אישיים כגון קרמים, איפור, שמפו וכו'. שמן צמחי חוחובה ניתן למרוח ישירות על העור נגד כוויות שמש, פסוריאזיס ואקנה. שמן חוחובה טהור מקדם גם את צמיחת השיער.

פְּרָט
שמן אתרי לבנדר אורגני טהור טבעי לטיפול בעור ארומתרפי

שיטת מיצוי או עיבוד: קיטור מזוקק

חלק מיצוי זיקוק: פרח

מקור המדינה: סין

יישום: מפוזר / ארומתרפיה / עיסוי

חיי מדף: 3 שנים

שירות מותאם אישית: תווית ותיבה מותאמים אישית או לפי הדרישה שלך

הסמכה: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA

פְּרָט
100% טהור טבעי אורגני Magnoliae Officmalis Cortex שמן שמן אתרי לטיפוח העור

הניחוח של Hou Po מריר מיד וחריף בצורה חדה ואז נפתח בהדרגה במתיקות עמוקה וסירופית וחמימות.

הזיקה של Hou Po היא ליסודות כדור הארץ והמתכת, שם החום המר שלו פועל בעוצמה כדי לרדת צ'י ולחות יבשה. בגלל תכונות אלו, הוא משמש ברפואה הסינית להקלה על סטגנציה והצטברות במערכת העיכול וכן שיעול וצפצופים עקב חסימת ליחה לריאות.

Magnolia Officinials הוא עץ נשיר שמקורו בהרים ובעמקים של סצ'ואן, הוביי ומחוזות אחרים של סין. הקליפה הארומטית ביותר המשמשת ברפואה הסינית המסורתית מופשטת מהגבעולים, הענפים והשורשים שנאספו במהלך אפריל עד יוני. לקליפה העבה והחלקה, כבדה בשמן, יש צבע ארגמני בצד הפנימי עם ברק דמוי גביש.

מתרגלים עשויים לשקול שילוב של Hou Po עם שמן אתרי Qing Pi כמחמאה תו עליון בתערובות שמטרתן לשבור הצטברויות.

פְּרָט
OEM חבילה מותאמת אישית שמן Macrocephalae Rhizoma טבעי

כחומר כימותרפי יעיל, 5-fluorouracil (5-FU) מיושם באופן נרחב לטיפול בגידולים ממאירים במערכת העיכול, בראש, בצוואר, בחזה ובשחלה. ו-5-FU היא התרופה הראשונה לסרטן המעי הגס במרפאה. מנגנון הפעולה של 5-FU הוא לחסום את ההפיכה של חומצת גרעין אורציל לחומצת גרעין תימין בתאי הגידול, ולאחר מכן להשפיע על הסינתזה והתיקון של DNA ו-RNA כדי להשיג את האפקט הציטוטוקסי שלו (Afzal et al., 2009; Ducreux et al. al., 2015; Longley et al., 2003). עם זאת, 5-FU מייצר גם שלשול המושרה על ידי כימותרפיה (CID), אחת מתגובות הלוואי השכיחות ביותר שמציקות לחולים רבים (Filho et al., 2016). השכיחות של שלשול בחולים שטופלו ב-5-FU הייתה עד 50%-80%, מה שהשפיע באופן רציני על ההתקדמות והיעילות של הכימותרפיה (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). כתוצאה מכך, ישנה חשיבות משמעותית למצוא טיפול יעיל עבור CID המושרה על ידי 5-FU.

כיום, התערבויות שאינן תרופתיות והתערבויות תרופתיות יובאו לטיפול הקליני ב-CID. התערבויות שאינן תרופתיות כוללות תזונה סבירה ותוספי מלח, סוכר וחומרים מזינים אחרים. תרופות כגון לופרמיד ואוקטריאוטיד משמשות בדרך כלל בטיפול נגד שלשולים של CID (Benson et al., 2004). בנוסף, תרופות אתנו מאומצות גם לטיפול ב-CID עם טיפול ייחודי משלהן במדינות שונות. הרפואה הסינית המסורתית (TCM) היא רפואה אתנו-טיפוסית אחת אשר נהוגה כבר יותר מ-2000 שנה במדינות מזרח אסיה כולל סין, יפן וקוריאה (Qi et al., 2010). TCM גורסת שתרופות כימותרפיות יגרמו לצריכת צ'י, מחסור בטחול, חוסר הרמוניה בקיבה ולחות אנדופיטית, וכתוצאה מכך חוסר תפקוד מוליך של המעיים. בתיאוריית ה-TCM, אסטרטגיית הטיפול של CID צריכה להיות תלויה בעיקר בתוספת צ'י ובחיזוק הטחול (Wang et al., 1994).

השורשים היבשים שלAtractylodes macrocephalaקוידז. (AM) וג'ינסנג PanaxCA מי. (PG) הן התרופות הצמחיות האופייניות ב-TCM עם אותן השפעות של תוספת צ'י וחיזוק הטחול (Li et al., 2014). AM ו-PG משמשים בדרך כלל כצמד עשבים (הצורה הפשוטה ביותר של תאימות צמחי מרפא סינית) עם השפעות של תוספת צ'י וחיזוק הטחול לטיפול בשלשול. לדוגמה, AM ו-PG תועדו בנוסחאות קלאסיות נגד שלשולים כמו Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang מ-Taiping Huimin Heji Ju Fang(שושלת השיר, סין) ובו ז'ונג יי צ'י טאנג מפי ווי לון(שושלת יואן, סין) (איור 1). מספר מחקרים קודמים דיווחו כי לכל שלוש הנוסחאות יש את היכולת להקל על CID (Bai et al., 2017; Chen et al., 2019; Gou et al., 2016). בנוסף, המחקר הקודם שלנו הראה שלקפסולת Shenzhu שמכילה רק AM ו-PG יש השפעות פוטנציאליות על הטיפולים של שלשולים, קוליטיס (תסמונת xiexie) ומחלות אחרות של מערכת העיכול (Feng et al., 2018). עם זאת, אף מחקר לא דן בהשפעה ובמנגנון של AM ו-PG בטיפול ב-CID, בין אם בשילוב ובין אם לבד.

כעת מיקרוביוטת מעיים נחשבת כגורם פוטנציאלי בהבנת המנגנון הטיפולי של TCM (Feng et al., 2019). מחקרים מודרניים מצביעים על כך שלמיקרוביוטה של המעיים תפקיד מכריע בשמירה על הומאוסטזיס של המעי. מיקרוביוטה בריאה של המעי תורמת להגנה על רירית המעי, לחילוף חומרים, להומאוסטזיס חיסוני ולתגובה ולדיכוי הפתוגנים (Thursby and Juge, 2017; Pickard et al., 2017). מיקרוביוטת מעיים מופרעת פוגעת בתפקודים הפיזיולוגיים והחיסונים של גוף האדם באופן ישיר או עקיף, וגורמת לתגובות לוואי כמו שלשול (Patel et al., 2016; Zhao and Shen, 2010). מחקרים הראו ש-5-FU שינה בצורה יוצאת דופן את מבנה המיקרוביוטה של המעי בעכברים שלשולים (Li et al., 2017). לכן, ההשפעות של AM ו-PM על שלשול המושרה על ידי 5-FU עשויות להיות מתווך על ידי מיקרוביוטה של המעיים. עם זאת, האם AM ו-PG לבד ובשילוב יכולים למנוע שלשול המושרה על ידי 5-FU על ידי מווסת מיקרוביוטה של המעיים עדיין לא ידוע.

על מנת לחקור השפעות נוגדות שלשולים והמנגנון הבסיסי של AM ו-PG, השתמשנו ב-5-FU כדי לדמות מודל שלשול בעכברים. כאן, התמקדנו בהשפעות הפוטנציאליות של מתן יחיד ומשולב (AP) שלAtractylodes macrocephalaשמן אתרי (AMO) וג'ינסנג Panaxסך ספונינים (PGS), הרכיבים הפעילים המופקים בהתאמה מ-AM ו-PG, על שלשולים, פתולוגיה של המעיים ומבנה מיקרוביאלי לאחר כימותרפיה של 5-FU.

פְּרָט
100% טהור טבעי Eucommiae Foliuml שמן שמן אתרי לטיפוח העור

Eucommia ulmoides(EU) (המכונה בדרך כלל "Du Zhong" בשפה הסינית) שייכים למשפחת Eucommiaceae, סוג של עץ קטן שמקורו במרכז סין [1]. צמח זה מטופח באופן נרחב בסין בקנה מידה גדול בגלל חשיבותו הרפואית. כ-112 תרכובות בודדו מהאיחוד האירופי הכוללות ליגנאנים, אירידואידים, פנולים, סטרואידים ותרכובות אחרות. נוסחת עשבי תיבול משלימה של צמח זה (כגון תה טעים) הראתה כמה תכונות מרפא. לעלה של האיחוד האירופי פעילות גבוהה יותר הקשורה לקורטקס, פרח ופירות [2,3]. העלים של האיחוד האירופי דווחו כמשפרים את חוזק העצמות ואת שרירי הגוף [4], ובכך מוביל לאריכות ימים ולקידום פוריות בבני אדם [5]. פורמולת תה טעימה עשויה מעלה של האיחוד האירופי דווחה כמפחיתה שומן ומשפרת את חילוף החומרים האנרגטי. תרכובות פלבונואידים (כגון רוטין, חומצה כלורוגנית, חומצה פרולית וחומצה קפאית) דווחו כמציגות פעילות נוגדת חמצון בעלים של האיחוד האירופי [6].

למרות שהיתה מספיק ספרות על תכונות פיטוכימיות של האיחוד האירופי, מחקרים מעטים היו קיימים על התכונות הפרמקולוגיות של התרכובות השונות המופקות מהקליפות, הזרעים, הגבעולים והעלים של האיחוד האירופי. מאמר סקירה זה יבהיר מידע מפורט לגבי תרכובות שונות המופקות מהחלקים השונים (קליפות, זרעים, גבעול ועלים) של האיחוד האירופי והשימושים הפוטנציאליים של תרכובות אלו בתכונות מקדמות בריאות עם קווי ראיה מדעיים ובכך יספק חומר עזר. ליישום האיחוד האירופי.

פְּרָט
שמן Houttuynia cordata טבעי טהור Houttuynia Cordata Oil Lchthammolum Oil

ברוב המדינות המתפתחות, 70-95% מהאוכלוסייה מסתמכים על תרופות מסורתיות לטיפול רפואי ראשוני ומתוכם 85% מהאנשים משתמשים בצמחים או בתמציות שלהם כחומר הפעיל.[1] החיפוש אחר תרכובות חדשות פעילות ביולוגית מצמחים תלוי בדרך כלל במידע האתני והעממי הספציפי המתקבל מהעוסקים המקומיים ועדיין נחשב כמקור חשוב לגילוי תרופות. בהודו, כ-2000 תרופות הן ממקור צמחי.[2] לאור העניין הנרחב בשימוש בצמחי מרפא, הסקירה הנוכחית עלHouttuynia cordataThunb. מספק מידע עדכני בהתייחס למחקרים בוטניים, מסחריים, אתנו-פרמקולוגיים, פיטוכימיים ותרופתיים המופיעים בספרות.ח קורדאטהThunb. שייך למשפחהSauuraceaeומכונה בדרך כלל זנב לטאה סינית. זהו עשב רב שנתי עם קנה שורש סטווניפרוס בעל שני כימוטיפים ברורים.[3,4] הכימוטיפ הסיני של המין נמצא בתנאים פראיים וחצי-פראיים בצפון מזרח הודו מאפריל עד ספטמבר.[5,6,7]ח קורדאטהזמין בהודו, במיוחד בעמק Brahmaputra של אסאם והוא מנוצל על ידי שבטים שונים של אסאם בצורה של ירקות כמו גם למטרות רפואיות שונות באופן מסורתי.

פְּרָט
100% שמן לאפה PureArctium יצרן - שמן ארקטיום לאפה סיד טבעי עם תעודות אבטחת איכות

יתרונות בריאותיים

שורש ברדוק נאכל לעתים קרובות, אך ניתן גם לייבש אותו ולהשרות אותו בתה. זה עובד היטב כמקור לאינולין, אפרה-ביוטיקהסיבים המסייעים לעיכול ומשפרים את בריאות המעיים. בנוסף, שורש זה מכיל פלבנואידים (חומרי הזנה מהצומח),פיטוכימיקלים, ונוגדי חמצון הידועים כבעלי יתרונות בריאותיים.

בנוסף, שורש ברדוק יכול לספק יתרונות נוספים כמו:

הפחתת דלקת כרונית

שורש בורדוק מכיל מספר נוגדי חמצון, כגון קוורצטין, חומצות פנוליות ולוטאולין, שיכולים לעזור להגן על התאים שלך מפנירדיקלים חופשיים. נוגדי חמצון אלו עוזרים להפחית דלקת בכל הגוף.

סיכונים בריאותיים

שורש ברדוק נחשב בטוח לאכילה או לשתייה כתה. עם זאת, צמח זה דומה מאוד לצמחי לילה בלדונה, שהם רעילים. מומלץ לקנות רק שורש ברדוק ממוכרים מהימנים ולהימנע מאיסוף בעצמך. בנוסף, יש מידע מינימלי על השפעותיו על ילדים או נשים הרות. שוחח עם הרופא שלך לפני השימוש בשורש ברדוק עם ילדים או אם אתה בהריון.

להלן כמה סיכונים בריאותיים אפשריים נוספים שכדאי לקחת בחשבון אם משתמשים בשורש ברדוק:

התייבשות מוגברת

שורש בורדוק פועל כמו משתן טבעי, מה שעלול להוביל להתייבשות. אם אתה נוטל כדורי מים או משתנים אחרים, אסור ליטול שורש ברדוק. אם אתה נוטל תרופות אלו, חשוב להיות מודעים לתרופות אחרות, צמחי מרפא ומרכיבים שעלולים להוביל להתייבשות.

תגובה אלרגית

אם אתה רגיש או שיש לך היסטוריה של תגובות אלרגיות לחינניות, סמרטוט או חרציות, אתה נמצא בסיכון מוגבר לתגובה אלרגית לשורש ברדוק.

פְּרָט
מחיר סיטונאי בתפזורת 100% טהור AsariRadix Et Rhizoma שמן Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus

מחקרים בבעלי חיים ומבחנה חקרו את ההשפעות האנטי-פטרייתיות, האנטי דלקתיות והקרדיווסקולריות הפוטנציאליות של ססאפרות ומרכיביה. עם זאת, חסרים ניסויים קליניים, וססאפראס אינה נחשבת בטוחה לשימוש. ספרול, המרכיב העיקרי של קליפת שורש סאספרס ושמן, נאסר על ידי מנהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA), כולל לשימוש כחומר טעם או ריח, ואין להשתמש בו פנימית או חיצונית, מכיוון שהוא עלול להיות מסרטן. ספרול שימש בייצור בלתי חוקי של 3,4-מתילן-דיאוקסימתאמפטמין (MDMA), הידוע גם בשמות הרחובות "אקסטזי" או "מולי", ומכירת שמן צפרול ושמן ססאפר מפוקחת על ידי מינהל אכיפת התרופות האמריקאי

פְּרָט
מחיר סיטונאי בתפזורת 100% שמן אתרי Stellariae Radix טהור (חדש) Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus

הפרמקופיה הסינית (מהדורת 2020) דורשת שתמצית המתנול של YCH לא תהיה פחותה מ-20.0% [2], ללא אינדיקטורים אחרים להערכת איכות. תוצאות מחקר זה מראות שתכולת תמציות המתנול של דגימות הבר והדגימות המעובדות עומדות בתקן הפרמקופיה, ולא היה הבדל משמעותי ביניהן. לפיכך, לא היה הבדל איכות ניכר בין דגימות בר ודגימות מעובדות, לפי מדד זה. עם זאת, תכולת סך הסטרולים והפלבנואידים הכוללים בדגימות הבר היו גבוהות משמעותית מאלו שבדגימות המתורבתות. ניתוח מטבולומי נוסף גילה מגוון מטבוליטים בשפע בין דגימות הבר והדגימות המעובדות. בנוסף, נבדקו 97 מטבוליטים שונים באופן משמעותי, המפורטים ב-טבלה משלימה S2. בין מטבוליטים שונים באופן משמעותי אלה הם β-sitosterol (הזיהוי הוא M397T42) ונגזרות קוורצטין (M447T204_2), אשר דווחו כמרכיבים פעילים. מרכיבים שלא דווחו בעבר, כגון טריגונלין (M138T291_2), בטאין (M118T277_2), פוסטין (M269T36), רוטנון (M241T189), ארקטאין (M557T165) וחומצה לוגנית (M4_29T28) נכללו גם הם בין המטבוליטים השונים. רכיבים אלה ממלאים תפקידים שונים בנוגדי חמצון, אנטי דלקתיים, ניקוי רדיקלים חופשיים, אנטי סרטן וטיפול בטרשת עורקים, ולכן עשויים להוות רכיבים פעילים חדשים משוערים ב-YCH. תכולת החומרים הפעילים קובעת את היעילות והאיכות של החומרים הרפואיים [7]. לסיכום, לתמצית מתנול כמדד הערכת האיכות היחיד של YCH יש כמה מגבלות, ויש לחקור עוד סמני איכות ספציפיים יותר. היו הבדלים משמעותיים בסך הסטרולים, סך הפלבנואידים ובתוכן של מטבוליטים דיפרנציאליים רבים אחרים בין ה-YCH הבר והמתורבת; אז, היו כמה הבדלי איכות ביניהם. יחד עם זאת, למרכיבים הפעילים הפוטנציאליים החדשים שהתגלו ב-YCH עשוי להיות ערך ייחוס חשוב לחקר הבסיס הפונקציונלי של YCH ולהמשך הפיתוח של משאבי YCH.

חשיבותם של חומרים רפואיים מקוריים הוכרה זה מכבר באזור המוצא הספציפי לייצור תרופות צמחיות סיניות באיכות מעולה [8]. איכות גבוהה היא תכונה חיונית של חומרים רפואיים אמיתיים, ובית הגידול הוא גורם חשוב המשפיע על איכותם של חומרים כאלה. מאז שהחלה YCH לשמש כתרופה, היא נשלטת זה מכבר על ידי YCH הבר. בעקבות ההקדמה והביות המוצלחים של YCH ב- Ningxia בשנות ה-80, המקור של החומרים הרפואיים של Yinchaihu עבר בהדרגה מ-YCH פראי לתרבותי. על פי חקירה קודמת של מקורות YCH [9] וחקירת השטח של קבוצת המחקר שלנו, ישנם הבדלים משמעותיים באזורי התפוצה של חומרי המרפא התרבותיים והבראיים. ה-YCH הפראי מופץ בעיקר באזור האוטונומי Ningxia Hui של מחוז Shaanxi, בסמוך לאזור הצחיח של מונגוליה הפנימית ומרכז Ningxia. במיוחד, הערבות המדבריות באזורים אלו היא בית הגידול המתאים ביותר לגידול YCH. לעומת זאת, ה-YCH המתורבת מופץ בעיקר לדרום אזור התפוצה הפראי, כמו מחוז טונגשין (מעובד I) והאזורים הסובבים אותו, שהפך לבסיס הגידול והייצור הגדול ביותר בסין, ומחוז פנגיאנג (מעובד II). , שנמצאת באזור דרומי יותר ומהווה אזור ייצור נוסף ליח' מעובד. יתר על כן, בתי הגידול של שני האזורים המעובדים לעיל אינם ערבות מדבריות. לכן, בנוסף לאופן הייצור, קיימים גם הבדלים משמעותיים בבית הגידול של YCH הבר והמתורבת. בית הגידול הוא גורם חשוב המשפיע על איכות החומרים הרפואיים הצמחיים. בתי גידול שונים ישפיעו על היווצרות והצטברות של מטבוליטים משניים בצמחים, ובכך ישפיעו על איכות המוצרים הרפואיים [10,11]. לכן, ההבדלים המשמעותיים בתכולת הפלבנואידים הכוללים והסטרולים הכוללים והביטוי של 53 המטבוליטים שמצאנו במחקר זה עשויים להיות תוצאה של ניהול שדות והבדלים בבתי גידול.

אחת הדרכים העיקריות שבהן הסביבה משפיעה על איכות החומרים הרפואיים היא על ידי הפעלת לחץ על צמחי המקור. מתח סביבתי מתון נוטה לעורר הצטברות של מטבוליטים משניים [12,13]. השערת איזון הצמיחה/הבחנה קובעת שכאשר יש אספקה מספקת של חומרים מזינים, הצמחים גדלים בעיקר, ואילו כאשר חומרי הזנה חסרים, הצמחים מתמיינים ומייצרים יותר מטבוליטים משניים [14]. לחץ בצורת הנגרם על ידי מחסור במים הוא הלחץ הסביבתי העיקרי איתו מתמודדים צמחים באזורים צחיחים. במחקר זה, מצב המים של ה-YCH התרבותי שופע יותר, עם רמות משקעים שנתיות גבוהות משמעותית מאלו של YCH הבר (אספקת המים ל-Cultivated I הייתה בערך פי שניים מזו של Wild; Cultivated II הייתה בערך פי 3.5 מזו של Wild. ). בנוסף, הקרקע בסביבה הפראית היא אדמה חולית, אך הקרקע בשטח החקלאי היא אדמת חרסית. בהשוואה לחימר, לאדמה חולית יש יכולת אגירת מים ירודה ויש סיכוי גבוה יותר להחמיר את לחץ הבצורת. יחד עם זאת, תהליך הגידול לווה לעיתים קרובות בהשקיה, ולכן מידת הלחץ בבצורת הייתה נמוכה. YCH פראי גדל בבתי גידול טבעיים צחיחים קשים, ולכן הוא עלול לסבול מלחץ בצורת חמור יותר.

ויסות אוסמו הוא מנגנון פיזיולוגי חשוב שבאמצעותו צמחים מתמודדים עם לחץ בצורת, ואלקלואידים הם מווסתים אוסמוטיים חשובים בצמחים גבוהים יותר [15]. בטאין הם תרכובות אמוניום רבעוניות אלקלואידיות מסיסות במים ויכולים לשמש כמגן אוסמו. סטרס בצורת יכול להפחית את הפוטנציאל האוסמוטי של תאים, בעוד שמגנים אוסמוטיים משמרים ושומרים על המבנה ושלמותן של מקרומולקולות ביולוגיות, ומקלים ביעילות על הנזק שנגרם מלחץ בצורת לצמחים [16]. לדוגמה, תחת לחץ בצורת, תכולת הבטאינים של סלק סוכר ו-Lycium barbarum עלתה משמעותית [17,18]. טריגונלין הוא מווסת של צמיחת תאים, ותחת לחץ בצורת, הוא יכול להאריך את אורך מחזור תאי הצמח, לעכב את צמיחת התאים ולהוביל להתכווצות נפח התאים. העלייה היחסית בריכוז המומסים בתא מאפשרת לצמח להגיע לוויסות אוסמוטי ולשפר את יכולתו לעמוד בפני לחץ בצורת [19]. JIA X [20] מצא כי, עם עלייה בלחץ הבצורת, Astragalus membranaceus (מקור לרפואה סינית מסורתית) ייצר יותר טריגונלין, הפועל לוויסות הפוטנציאל האוסמוטי ולשפר את היכולת להתנגד ללחץ בצורת. כמו כן, הוכח כי פלבנואידים ממלאים תפקיד חשוב בעמידות הצמחים ללחץ בצורת [21,22]. מספר רב של מחקרים אישרו שלחץ בצורת מתון היה תורם להצטברות של פלבנואידים. Lang Duo-Yong et al. [23] השוו את ההשפעות של מתח בצורת על YCH על ידי שליטה ביכולת החזקת מים בשטח. נמצא שלחץ בצורת מעכב את צמיחת השורשים במידה מסוימת, אך בלחץ בצורת בינוני וחמור (40% יכולת אחיזת מי שדה), תכולת הפלבנואידים הכוללת ב-YCH עלתה. בינתיים, תחת לחץ בצורת, פיטוסטרולים יכולים לפעול כדי לווסת את נזילות קרום התא וחדירותו, לעכב אובדן מים ולשפר עמידות ללחץ [24,25]. לכן, ההצטברות המוגברת של סך הפלבנואידים, סך הסטרולים, בטאין, טריגונלין ומטבוליטים משניים אחרים ב-YCH פראי עשויה להיות קשורה ללחץ בצורת בעוצמה גבוהה.

במחקר זה, בוצע ניתוח העשרה של מסלולי KEGG על המטבוליטים שנמצאו שונים באופן מובהק בין YCH הפראי למתורבת. המטבוליטים המועשרים כללו את אלו המעורבים במסלולים של מטבוליזם של אסקורבט ו-aldarate, ביוסינתזה של aminoacyl-tRNA, מטבוליזם של היסטידין וחילוף חומרים בטא-אלנין. מסלולים מטבוליים אלו קשורים קשר הדוק למנגנוני עמידות ללחץ בצמחים. ביניהם, חילוף החומרים של אסקורבט ממלא תפקיד חשוב בייצור נוגדי חמצון צמחיים, חילוף החומרים של פחמן וחנקן, עמידות ללחץ ותפקודים פיזיולוגיים אחרים.26]; ביוסינתזה של aminoacyl-tRNA היא מסלול חשוב ליצירת חלבון [27,28], המעורב בסינתזה של חלבונים עמידים ללחץ. גם מסלולי היסטידין וגם β-אלנין יכולים לשפר את סבילות הצמחים ללחץ סביבתי [29,30]. זה מצביע עוד יותר על כך שההבדלים במטבוליטים בין YCH הפראי והמתורבת היו קשורים קשר הדוק לתהליכים של עמידות ללחץ.

אדמה היא הבסיס החומרי לצמיחה והתפתחות של צמחי מרפא. חנקן (N), זרחן (P) ואשלגן (K) באדמה הם יסודות תזונתיים חשובים לצמיחה והתפתחות של צמחים. חומר אורגני בקרקע מכיל גם N, P, K, Zn, Ca, Mg ומרכיבי מאקרו ויסודות קורט אחרים הדרושים לצמחי מרפא. עודף או חסר של רכיבי תזונה, או יחסי תזונה לא מאוזנים, ישפיעו על הצמיחה וההתפתחות ועל איכות החומרים הרפואיים, ולצמחים שונים יש דרישות תזונתיות שונות [31,32,33]. לדוגמה, מתח N נמוך קידם את הסינתזה של אלקלואידים ב-Isatis indigotica, והועיל להצטברות של פלבנואידים בצמחים כמו Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge ו-Dichondra repens Forst. לעומת זאת, יותר מדי N עיכב הצטברות של פלבנואידים במינים כמו Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis ו-Ginkgo biloba, והשפיע על איכות החומרים הרפואיים.34]. היישום של דשן P היה יעיל בהגדלת תכולת החומצה הגליצריזית ודיהידרואצטון בשוש אוראל [35]. כאשר כמות המריחה עלתה על 0·12 kg·m−2, תכולת הפלבנואידים הכוללת ב- Tussilago farfara ירדה [36]. ליישום של דשן P הייתה השפעה שלילית על תכולת הפוליסכרידים ברפואה הסינית המסורתית rhizoma polygonati [37], אך דשן K היה יעיל בהגדלת תכולת הספונינים שלו [38]. מריחת דשן של 450 ק"ג·hm−2 K הייתה הטובה ביותר לגדילה והצטברות ספונין של נוטוגינסנג Panax בן שנתיים [39]. תחת היחס של N:P:K = 2:2:1, הכמויות הכוללות של תמצית הידרותרמית, harpagide וה-harpagoside היו הגבוהות ביותר [40]. היחס הגבוה של N, P ו-K היה מועיל כדי לקדם את הצמיחה של בקלין Pogostemon ולהגדיל את התוכן של שמן נדיף. יחס נמוך של N, P ו-K הגדיל את התוכן של המרכיבים היעילים העיקריים של שמן עלי גזע Pogostemon [41]. YCH הוא צמח סובל אדמה עקרה, וייתכן שיש לו דרישות ספציפיות לחומרי הזנה כגון N, P ו-K. במחקר זה, בהשוואה ל-YCH התרבותי, האדמה של צמחי YCH הבר הייתה עקרה יחסית: תכולת הקרקע. של חומר אורגני, סך N, סך P וסה"כ K היו כ-1/10, 1/2, 1/3 ו-1/3 מאלו של הצמחים התרבותיים, בהתאמה. לכן, ההבדלים בחומרי הזנה בקרקע עשויים להיות סיבה נוספת להבדלים בין המטבוליטים שזוהו ב-YCH התרבותי והפראי. Weibao Ma et al. [42] מצא כי מריחת כמות מסוימת של דשן N ודשן P שיפרה משמעותית את היבול ואיכות הזרעים. עם זאת, ההשפעה של רכיבים תזונתיים על איכות YCH אינה ברורה, ואמצעי הפריה לשיפור איכות החומרים הרפואיים זקוקים למחקר נוסף.

לתרופות צמחיות סיניות יש את המאפיינים של "בתי גידול נוחים מקדמים יבול, ובתי גידול לא נוחים משפרים את האיכות" [43]. בתהליך של מעבר הדרגתי מ-YCH פראי למעובד, בית הגידול של הצמחים השתנה מהערבות המדבריות הצחיחות והעקרה לאדמות חקלאיות פוריות עם מים בשפע. בית הגידול של ה-YCH התרבותי מעולה והיבול גבוה יותר, מה שמועיל לענות על הביקוש בשוק. עם זאת, בית גידול מעולה זה הוביל לשינויים משמעותיים במטבוליטים של YCH; האם זה תורם לשיפור האיכות של YCH וכיצד להשיג ייצור באיכות גבוהה של YCH באמצעות אמצעי טיפוח מבוססי מדע ידרוש מחקר נוסף.

גידול בית גידול סימולטיבי הוא שיטה להדמיית בית הגידול ותנאי הסביבה של צמחי מרפא בר, המבוססת על ידע של הסתגלות ארוכת טווח של הצמחים ללחצים סביבתיים ספציפיים.43]. על ידי הדמיית גורמים סביבתיים שונים המשפיעים על צמחי הבר, במיוחד בית הגידול המקורי של צמחים המשמשים כמקורות לחומרי מרפא אותנטיים, הגישה משתמשת בתכנון מדעי ובהתערבות אנושית חדשנית כדי לאזן את הצמיחה והמטבוליזם המשני של צמחי מרפא סיניים [43]. השיטות שואפות להשיג את הסדרים האופטימליים לפיתוח חומרים רפואיים איכותיים. גידול בית גידול סימולטיבי אמור לספק דרך יעילה לייצור באיכות גבוהה של YCH גם כאשר הבסיס הפרמקודינמי, סמני האיכות ומנגנוני התגובה לגורמים סביבתיים אינם ברורים. בהתאם לכך, אנו מציעים שאמצעי תכנון מדעי וניהול שדה בגידול וייצור YCH יתבצעו תוך התייחסות למאפיינים הסביבתיים של YCH פראי, כגון תנאי קרקע צחיחים, עקרים וחוליים. במקביל, יש לקוות גם שחוקרים יבצעו מחקר מעמיק יותר על בסיס החומר הפונקציונלי וסמני האיכות של YCH. מחקרים אלה יכולים לספק קריטריוני הערכה יעילים יותר עבור YCH, ולקדם את הייצור האיכותי והפיתוח בר-קיימא של התעשייה.

פְּרָט
צמחים Fructus Amomi שמן מפזר עיסוי טבעי 1 ק"ג בתפזורת Amomum villosum שמן אתרי

משפחת ה-Zingiberaceae משכה תשומת לב גוברת במחקר האללופתי בגלל השמנים הנדיפים העשירים והארומטית של המינים החברים בה. מחקר קודם הראה שהכימיקלים מכורכומה זדואריה (זדוארי) [40], Alpinia zerumbet (פרס.) BLBurtt & RMSm. [41] ו-Zingiber officinale Rosc. [42] ממשפחת הג'ינג'ר יש השפעות אללופטיות על נביטת זרעים וצמיחת שתילים של תירס, חסה ועגבנייה. המחקר הנוכחי שלנו הוא הדו"ח הראשון על הפעילות האללופתית של חומרים נדיפים מגבעולים, עלים ופירות צעירים של A. villosum (בן למשפחת Zingiberaceae). תפוקת השמן של גבעולים, עלים ופירות צעירים הייתה 0.15%, 0.40% ו-0.50%, בהתאמה, מה שמצביע על כך שפירות הפיקו כמות גדולה יותר של שמנים נדיפים מאשר גבעולים ועלים. המרכיבים העיקריים של שמנים נדיפים מגבעולים היו β-pinene, β-phellandrene ו-α-pinene, שהיה דפוס דומה לזה של הכימיקלים העיקריים של שמן עלים, β-pinene ו-α-pinene (פחמימנים מונוטרפן). מצד שני, השמן בפירות צעירים היה עשיר בבורניל אצטט ובקמפור (מונוטרפנים מחומצנים). התוצאות נתמכו על ידי הממצאים של Do N Dai [30,32] ו-Hui Ao [31] שזיהה את השמנים מאיברים שונים של A. villosum.

היו מספר דיווחים על פעילויות מעכבות צמיחת צמחים של תרכובות עיקריות אלו במינים אחרים. שאלינדר קאור מצא כי α-pinene מאקליפטוס דיכא בצורה בולטת את אורך השורשים ואת גובה היריות של Amaranthus viridis L. בריכוז של 1.0 μL [43], ומחקר אחר הראה כי α-pinene עיכב צמיחה מוקדמת של שורש וגרם לנזק חמצוני ברקמת השורש באמצעות יצירה מוגברת של מיני חמצן תגובתיים [44]. כמה דיווחים טענו כי β-pinene מעכב נביטה וצמיחת שתילים של עשבים נבדקים באופן תגובה תלוי מינון על ידי שיבוש שלמות הממברנה [45], שינוי הביוכימיה של הצמח ושיפור הפעילות של פרוקסידאזים ופוליפנול אוקסידאזים [46]. β-Phellandrene הפגין עיכוב מירבי לנביטה ולצמיחה של Vigna unguiculata (L.) Walp בריכוז של 600 ppm [47], בעוד שבריכוז של 250 מ"ג/מ"ק, קמפור דיכא את צמיחת השורש והזרעים של Lepidium sativum L. [48]. עם זאת, המחקר המדווח על ההשפעה האללופתית של בורניל אצטט הוא מועט. במחקר שלנו, ההשפעות האללופתיות של β-pinene, bornyl acetate and camphor על אורך השורשים היו חלשות יותר מאשר עבור השמנים הנדיפים למעט α-pinene, בעוד ששמן עלים, עשיר ב-α-pinene, היה גם פיטוטוקסי יותר מהנדיף המקביל. שמנים מהגבעולים והפירות של A. villosum, שני הממצאים מצביעים על כך ש-α-pinene עשוי להיות הכימיקל החשוב לאלופתיה של מין זה. יחד עם זאת, התוצאות גם רמזו שכמה תרכובות בשמן הפרי שלא היו בשפע עשויות לתרום לייצור האפקט הפיטוטוקסי, ממצא שצריך מחקר נוסף בעתיד.

בתנאים רגילים, ההשפעה האללופטית של אללוכימיקלים היא ספציפית למין. Jiang et al. מצא ששמן אתרי המיוצר על ידי Artemisia sieversiana השפיע חזק יותר על Amaranthus retroflexus L. מאשר על Medicago sativa L., Poa annua L. ו- Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. במחקר אחר, השמן הנדיף של Lavandula angustifolia Mill. יצר דרגות שונות של השפעות פיטוטוקסיות על מיני צמחים שונים. Lolium multiflorum Lam. היה המין המקבל הרגיש ביותר, צמיחת hypocotyl ו-radicle עוכבה ב-87.8% ו-76.7%, בהתאמה, במינון של 1 μL/mL שמנים, אך צמיחת hypocotyl של שתילי מלפפון כמעט ולא הושפעה [20]. התוצאות שלנו גם הראו שיש הבדל ברגישות לחומרים נדיפים של A. villosum בין L. sativa ל- L. perenne.

התרכובות הנדיפות והשמנים האתריים מאותו מין יכולים להשתנות כמותית ו/או איכותית בגלל תנאי הגידול, חלקי הצמח ושיטות הזיהוי. לדוגמה, דו"ח הראה שפירנואיד (10.3%) ו-β-caryophyllene (6.6%) היו התרכובות העיקריות של החומרים הנדיפים הנפלטים מעלים של Sambucus nigra, בעוד שבנזלדהיד (17.8%), α-בולנסן (16.6%) וטטרקוזן. (11.5%) היו בשפע בשמנים שהופקו מעלים [50]. במחקר שלנו, לתרכובות נדיפות ששוחררו על ידי חומרי הצמח הטריים היו השפעות אללופטיות חזקות יותר על צמחי הבדיקה מאשר לשמנים הנדיפים המופקים, ההבדלים בתגובה קשורים קשר הדוק להבדלים באללכימיקלים הקיימים בשני התכשירים. יש לחקור עוד יותר את ההבדלים המדויקים בין תרכובות נדיפות ושמנים בניסויים הבאים.

הבדלים במגוון המיקרוביאלי ובמבנה הקהילה המיקרוביאלית בדגימות קרקע להן נוספו שמנים נדיפים היו קשורים לתחרות בין מיקרואורגניזמים וכן להשפעות רעילות כלשהן ולמשך הזמן של שמנים נדיפים בקרקע. ווקאו וליוטירי [51] מצא כי היישום בהתאמה של ארבעה שמנים אתריים (0.1 מ"ל) על אדמה מעובדת (150 גרם) הפעיל נשימה של דגימות הקרקע, אפילו השמנים היו שונים בהרכבם הכימי, מה שמרמז על כך ששמנים צמחיים משמשים כמקור פחמן ואנרגיה על ידי מיקרואורגניזמים בקרקע. נתונים שהתקבלו מהמחקר הנוכחי אישרו כי השמנים מכל הצמח של A. villosum תרמו לגידול הברור במספר מיני פטריית הקרקע עד ליום ה-14 לאחר הוספת השמן, מה שמצביע על כך שהשמן עשוי לספק את מקור הפחמן ליותר פטריות אדמה. מחקר אחר דיווח על ממצא: מיקרואורגניזמים בקרקע החזירו את תפקודם הראשוני ואת הביומסה שלהם לאחר תקופה זמנית של שינויים שנגרמו כתוצאה מהוספה של שמן Thymbra capitata L. (Cav), אך השמן במינון הגבוה ביותר (0.93 µL שמן לגרם אדמה) לא אפשר למיקרואורגניזמים באדמה לשחזר את הפונקציונליות הראשונית [52]. במחקר הנוכחי, בהתבסס על הניתוח המיקרוביולוגי של הקרקע לאחר טיפול בימים וריכוזים שונים, שיערנו שקהילת חיידקי הקרקע תתאושש לאחר ימים נוספים. לעומת זאת, המיקרוביוטה הפטרייתית אינה יכולה לחזור למצבה המקורי. התוצאות הבאות מאששות השערה זו: ההשפעה המובהקת של ריכוז גבוה של השמן על הרכב המיקרוביום הפטרייתי של הקרקע נחשפה על ידי ניתוח קואורדינטות עיקריות (PCoA), ומצגות מפת החום אישרו שוב שהרכב הקהילה הפטרייתית של הקרקע מטופל ב-3.0 מ"ג/מ"ל שמן (כלומר 0.375 מ"ג שמן לגרם אדמה) ברמת הסוג שונה במידה ניכרת משאר הטיפולים. נכון לעכשיו, המחקר על ההשפעות של הוספת פחמימנים מונוטרפן או מונוטרפנים מחומצנים על המגוון המיקרוביאלי של הקרקע ומבנה הקהילה עדיין מועט. מספר מחקרים דיווחו כי α-pinene הגביר את הפעילות המיקרוביאלית של הקרקע ואת השפע היחסי של Methylophilaceae (קבוצה של methylotrophs, Proteobacteria) תחת תכולת לחות נמוכה, וממלא תפקיד חשוב כמקור פחמן בקרקעות יבשות יותר.53]. באופן דומה, שמן נדיף של צמח שלם A. villosum, המכיל 15.03% α-pinene (טבלה משלימה S1), ברור שהגדילה את השפע היחסי של פרוטאובקטריה ב-1.5 מ"ג/מ"ל ו-3.0 מ"ג/מ"ל, מה שהציע שאף-פינן משמש אולי כאחד ממקורות הפחמן למיקרואורגניזמים בקרקע.

לתרכובות הנדיפות שיוצרו על ידי איברים שונים של A. villosum היו דרגות שונות של השפעות אללופתיות על L. sativa ו- L. perenne, שהיה קשור קשר הדוק למרכיבים הכימיים שחלקי הצמח A. villosum הכילו. למרות שההרכב הכימי של השמן הנדיף אושר, התרכובות הנדיפות ששוחררו על ידי A. villosum בטמפרטורת החדר אינן ידועות, אשר דורשות חקירה נוספת. יתר על כן, ההשפעה הסינרגטית בין אללוכימיקלים שונים ראויה גם לבחינה. במונחים של מיקרואורגניזמים בקרקע, כדי לחקור את השפעת השמן הנדיף על מיקרואורגניזמים בקרקע באופן מקיף, אנחנו עדיין צריכים לערוך מחקר מעמיק יותר: להאריך את זמן הטיפול בשמן נדיף ולהבחין בשינויים בהרכב הכימי של השמן הנדיף באדמה בימים שונים.

פְּרָט
שמן אתרי ארטמיסיה קפילריס טהור עבור נרות וסבון ייצור שמן אתרי מפזר סיטונאי חדש עבור מפיצי מבערי קנים

עיצוב דגם מכרסמים

החיות חולקו באופן אקראי לחמש קבוצות של חמישה עשר עכברים כל אחת. קבוצת הביקורת והעכברים של קבוצת המודל טופלושמן שומשוםלמשך 6 ימים. עכברים בקבוצת ביקורת חיובית קיבלו מתן טבליות ביפנדאט (BT, 10 מ"ג/ק"ג) למשך 6 ימים. קבוצות הניסוי טופלו ב-100 מ"ג/ק"ג ו-50 מ"ג/ק"ג AEO מומס בשמן שומשום במשך 6 ימים. ביום 6, קבוצת הביקורת טופלה בשמן שומשום, וכל שאר הקבוצות טופלו במינון בודד של 0.2% CCl4 בשמן שומשום (10 מ"ל/ק"ג) על ידיהזרקה תוך פריטונאלית. לאחר מכן צמו העכברים ללא מים, ודגימות דם נאספו מכלי הרטרובולברי; דם שנאסף עבר צנטריפוגה ב-3000 ×gלמשך 10 דקות כדי להפריד את הסרום.נקע צוואר הרחםבוצע מיד לאחר הוצאת הדם, ודגימות כבד הוסרו מיד. חלק אחד של דגימת הכבד אוחסן מיד ב-20 מעלות צלזיוס עד לניתוח, וחלק אחר נכרת וקבוע ב-10%פורמליןפִּתָרוֹן; הרקמות הנותרות אוחסנו ב-80 מעלות צלזיוס לצורך ניתוח היסטופתולוגי (Wang et al., 2008,Hsu et al., 2009,Nie et al., 2015).

מדידת הפרמטרים הביוכימיים בסרום

פגיעה בכבד הוערכה על ידי אומדןפעילות אנזימטיתשל סרום ALT ו-AST תוך שימוש בערכות המסחריות המתאימות בהתאם להוראות לערכות (נאנג'ינג, מחוז ג'יאנגסו, סין). הפעילויות האנזימטיות הובעו כיחידות לליטר (U/l).

מדידת מד"א, SOD, GSH ו-GSH-Pxבהומוגניות כבד

רקמות הכבד הומוגגו עם מי מלח פיזיולוגי קר ביחס של 1:9 (w/v, כבד:מי מלח). ההומוגנטים עברו צנטריפוגה (2500 ×gבמשך 10 דקות) כדי לאסוף את הסופרנטנטים לקביעות הבאות. הנזק לכבד הוערך על פי מדידות הכבד של רמות MDA ו-GSH וכן SOD ו-GSH-Pxפעילויות. כל אלה נקבעו בהתאם להוראות על הערכה (נאנג'ינג, מחוז ג'יאנגסו, סין). התוצאות עבור MDA ו-GSH באו לידי ביטוי כ-nmol למ"ג חלבון (nmol/mg prot), והפעילויות של SOD ו-GSH-Pxהובאו כ-U למ"ג חלבון (U/mg prot).

ניתוח היסטופתולוגי

חלקים של כבד שהתקבל טרי היו קבועים במאגר של 10%.פרפורמלדהידתמיסת פוספט. לאחר מכן הדגימה הוטבעה בפרפין, נחתכה לפרוסות של 3-5 מיקרומטר, וצבעה עםהמטוקסיליןואאוסין(H&E) על פי נוהל סטנדרטי, ולבסוף מנותח על ידימיקרוסקופ אור(טיאן וחב', 2012).

ניתוח סטטיסטי

התוצאות הובעו כממוצע ± סטיית תקן (SD). התוצאות נותחו באמצעות התוכנית הסטטיסטית SPSS Statistics, גרסה 19.0. הנתונים עברו ניתוח שונות (ANOVA,p< 0.05) ואחריו מבחן Dunnett ומבחן T3 של Dunnett כדי לקבוע את ההבדלים המובהקים סטטיסטית בין הערכים של קבוצות ניסוי שונות. הבדל משמעותי נחשב ברמה שלp< 0.05.

תוצאות ודיון

מרכיבי AEO

בניתוח GC/MS, נמצא שה-AEO מכיל 25 מרכיבים שנפלטו מ-10 עד 35 דקות, ו-21 מרכיבים המהווים 84% מהשמן האתרי זוהו (טבלה 1). השמן הנדיף הכילמונוטרפנואידים(80.9%), ססקוויטרפנואידים (9.5%), פחמימנים לא מסועפים רוויים (4.86%) ואצטילן שונים (4.86%). בהשוואה למחקרים אחרים (Guo et al., 2004), מצאנו מונוטרפנואידים בשפע (80.90%) ב-AEO. התוצאות הראו כי המרכיב השכיח ביותר של AEO הוא β-citronellol (16.23%). מרכיבים עיקריים אחרים של AEO כוללים 1,8-cineole (13.9%),קַמפוֹר(12.59%),לנאלול(11.33%), α-pinene (7.21%), β-pinene (3.99%),תימול(3.22%), ומירקן(2.02%). השונות בהרכב הכימי עשויה להיות קשורה לתנאים הסביבתיים אליהם נחשף הצמח, כגון מים מינרליים, אור שמש, שלב ההתפתחות ותְזוּנָה.

פְּרָט
שמן Saposhnikovia divaricata טהור לייצור נרות וסבון שמן אתרי מפזר סיטונאי חדש עבור מפיצי מבערי קנים

2.1. הכנת SDE

קני השורש של SD נרכשו כצמח מיובש מ-Hanherb Co. (Guri, קוריאה). החומרים הצמחיים אושרו מבחינה טקסונומית על ידי ד"ר גו-יה צ'וי מהמכון של קוריאה לרפואה מזרחית (KIOM). דגימת שובר (מספר 2014 SDE-6) הופקדה בעשבון הקוריאני של משאבי צמחים סטנדרטיים. קני שורש מיובשים של SD (320 גרם) חולצו פעמיים עם 70% אתנול (עם ריפלוקס של 2 שעות) ולאחר מכן התמצית רוכזה בלחץ מופחת. המרתח עבר סינון, ליאופיל, ואוחסן ב-4 מעלות צלזיוס. התשואה של תמצית מיובשת מחומרי מוצא גולמיים הייתה 48.13% (w/w).

2.2. ניתוח כרומטוגרפיה נוזלית כמותית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC).

ניתוח כרומטוגרפי בוצע עם מערכת HPLC (Waters Co., Milford, MA, ארה"ב) וגלאי מערך פוטודיודות. עבור ניתוח HPLC של SDE, הפרי-Oתקן glucosylcimifugin נרכש מהמכון לקידום מכירות של קוריאה לתעשיית הרפואה המסורתית (Gyeongsan, קוריאה), וכןsec-O-glucosylhamaudol ו-4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisaminol בודדו במעבדה שלנו וזוהו על ידי ניתוחים ספקטרליים, בעיקר על ידי NMR ו-MS.

דגימות SDE (0.1 מ"ג) הומסו ב-70% אתנול (10 מ"ל). הפרדה כרומטוגרפית בוצעה עם עמודת XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 מ"מ, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ארה"ב). השלב הנייד כלל מאצטוניטריל (A) ו-0.1% חומצה אצטית במים (B) בקצב זרימה של 1.0 מ"ל לדקה. נעשה שימוש בתוכנית שיפוע רב-שלבית כדלקמן: 5% A (0 דקות), 5-20% A (0-10 דקות), 20% A (10-23 דקות), ו-20-65% A (23-40 דקות) ). אורך גל הזיהוי נסרק ב-210-400 ננומטר ונרשם ב-254 ננומטר. נפח ההזרקה היה 10.0μL. פתרונות סטנדרטיים לקביעת שלושה כרומונים הוכנו בריכוז סופי של 7.781 מ"ג/מ"ל (פרי-O-glucosylcimifugin), 31.125 מ"ג/מ"ל (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-מתיל ויסאמינול), ו-31.125 מ"ג/מ"ל (sec-O-glucosylhamaudol) במתנול ונשמר ב-4 מעלות צלזיוס.

2.3. הערכת פעילות אנטי דלקתיתבַּמַבחֵנָה

2.3.1. תרבית תאים וטיפול בדגימות

תאי RAW 264.7 התקבלו מאוסף American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ארה"ב) וגודלו במדיום DMEM המכיל 1% אנטיביוטיקה ו-5.5% FBS. תאים הודגרו באווירה לחה של 5% CO2 ב-37 מעלות צלזיוס. כדי לעורר את התאים, המדיום הוחלף במדיום DMEM טרי, וליפופוליסכריד (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ארה"ב) ב-1μגרם/מ"ל נוספה בנוכחות או בהיעדר SDE (200 או 400μגרם/מ"ל) למשך 24 שעות נוספות.

2.3.2. קביעת תחמוצת החנקן (NO), פרוסטגלנדין E2 (PGE2), גורם נמק גידול-α(TNF-α), וייצור Interleukin-6 (IL-6).

תאים טופלו ב-SDE ועוררו ב-LPS למשך 24 שעות. ייצור NO נותח על ידי מדידת ניטריט באמצעות ריאגנט Griess על פי מחקר קודם [12]. הפרשת הציטוקינים הדלקתיים PGE2, TNF-α, ו-IL-6 נקבע באמצעות ערכת ELISA (מערכות מו"פ) לפי הוראות היצרן. ההשפעות של SDE על ייצור NO וציטוקינים נקבעו ב-540 ננומטר או 450 ננומטר באמצעות Wallac EnVision™קורא microplate (PerkinElmer).

2.4. הערכה של פעילות אנטי-אוסטאוארטריטיסב-Vivo

2.4.1. בַּעֲלֵי חַיִים

חולדות Sprague-Dawley זכרים (בני 7 שבועות) נרכשו מחברת Samtako Inc. (אוסאן, קוריאה) ושוכנו בתנאים מבוקרים עם מחזור אור/חושך של 12 שעות בשעהמעלות צלזיוס ו% לחות. חולדות קיבלו דיאטת מעבדה ומיםבאופן חופשי. כל ההליכים הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות המכון הלאומי לבריאות (NIH) ואושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת דיג'און (דייג'ון, הרפובליקה של קוריאה).

2.4.2. אינדוקציה של OA עם MIA בחולדות

החיות חולקו באקראי והוקצו לקבוצות טיפול לפני תחילת המחקר (לכל קבוצה). תמיסת MIA (3 מ"ג/50μL של 0.9% מי מלח) הוזרק ישירות לחלל התוך מפרקי של ברך ימין תחת הרדמה המושרה עם תערובת של קטמין וקסילאזין. חולדות חולקו באופן אקראי לארבע קבוצות: (1) קבוצת מלוחים ללא הזרקת MIA, (2) קבוצת MIA עם הזרקת MIA, (3) הקבוצה שטופלה ב-SDE (200 מ"ג/ק"ג) עם הזרקת MIA, ו-(4) ) הקבוצה שטופלה ב-indomethacin (IM-) (2 מ"ג/ק"ג) עם הזרקת MIA. חולדות ניתנו דרך הפה עם SDE ו-IM שבוע לפני הזרקת MIA למשך 4 שבועות. המינון של SDE ו-IM ששימשו במחקר זה התבסס על אלו שהועסקו במחקרים קודמים [10,13,14].

2.4.3. מדידות של חלוקת משקל נושאת הכפה האחורית

לאחר השראת OA, האיזון המקורי ביכולת נשיאת המשקל של הכפות האחוריות הופרע. בודק אי-יכולת (מכשור לינטון, נורפולק, בריטניה) שימש להערכת שינויים בסבילות נושאת המשקל. חולדות הונחו בזהירות לתוך תא המדידה. הכוח נושא המשקל שהופעל על ידי הגפה האחורית היה ממוצע על פני תקופה של 3 שניות. יחס חלוקת המשקל חושב על ידי המשוואה הבאה: [משקל על גפה אחורית ימנית/(משקל על גפה אחורית ימנית + משקל על גפה אחורית שמאל)] × 100 [15].

2.4.4. מדידות של רמות ציטוקינים בסרום

דגימות הדם עברו צנטריפוגה ב-1,500 גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס; לאחר מכן, הסרום נאסף ואוחסן ב-70 מעלות צלזיוס עד לשימוש. הרמות של IL-1β, IL-6, TNF-α, ו-PGE2 בסרום נמדדו באמצעות ערכות ELISA של R&D Systems (Minneapolis, MN, ארה"ב) לפי הוראות היצרן.

2.4.5. ניתוח RT-PCR כמותי בזמן אמת

ה-RNA הכולל הופק מרקמת מפרק הברך באמצעות TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ארה"ב), הועתק לאחור ל-cDNA והוגבר PCR באמצעות ערכת TM One Step RT PCR עם ירוק SYBR (Applied Biosystems , גרנד איילנד, ניו יורק, ארה"ב). PCR כמותי בזמן אמת בוצע באמצעות מערכת Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ארה"ב). רצפי הפריימר ורצף הבדיקה מוצגים בטבלה1. מנות של דגימות cDNA וכמות שווה של GAPDH cDNA הוגברו עם תערובת האב TaqMan® Universal PCR המכילה DNA פולימראז לפי הוראות היצרן (Applied Biosystems, Foster, CA, ארה"ב). תנאי ה-PCR היו 2 דקות ב-50°C, 10 דקות ב-94°C, 15 שניות ב-95°C, ודקה אחת ב-60°C למשך 40 מחזורים. ריכוז גן המטרה נקבע באמצעות שיטת Ct השוואתית (מספר מחזור סף בנקודת הצלבה בין חלקת הגברה לסף), על פי הוראות היצרן.

פְּרָט