מפעל שמן אתרי בתפזורת | יצרנים וספקים של שמן אתרי בסין

שמן אתרי עלי אקליפטוס טבעיים טהורים ארומתרפיה לטיפוח עור הגוף

שיטת מיצוי או עיבוד: זיקוק בקיטור

חלק מיצוי זיקוק: עלה

מקור המדינה: סין

יישום: מפוזר/ארומתרפיה/עיסוי

חיי מדף: 3 שנים

שירות מותאם אישית: תווית וקופסה בהתאמה אישית או לפי הדרישה שלך

הסמכה: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA

שמן אקליפטוס מגיב עם ריר ומשחרר אותו כדי לספק הקלה מיידית מקוצר נשימה ובעיות נשימה אחרות. הוא חזק מספיק כדי לפעול כדוחה חרקים. כאשר משתמשים בו בארומתרפיה, הוא מספק בהירות מחשבתית. יתרונותיו הטיפוליים נובעים מתכונותיו האנטי-מיקרוביאליות, אנטיבקטריאליות, חיטוי, נוגדות עוויתות ואנטי-ויראליות. השתמשו בשמן אקליפטוס כנגד מגוון מצבי עור ובריאות. הוא מכיל אקליפטול, הידוע גם בשם צינאול. תרכובת זו תתמוך בבריאות וברווחה הכללית שלכם.

פְּרָט
שמן אתרי לבנדר אורגני טהור טבעי לטיפוח עור ארומתרפי

שיטת מיצוי או עיבוד: זיקוק בקיטור

חלק מיצוי זיקוק: פרח

מקור המדינה: סין

יישום: מפוזר/ארומתרפיה/עיסוי

חיי מדף: 3 שנים

שירות מותאם אישית: תווית וקופסה בהתאמה אישית או לפי הדרישה שלך

הסמכה: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA

פְּרָט
שמן אתרי Magnoliae Officmalis Cortex 100% טבעי אורגני טהור לטיפוח העור

ניחוחו של הו פו הוא מיד מר וחריף ואז נפתח בהדרגה עם מתיקות עמוקה, סירופית וחמימות.

הזיקה של הו פו היא ליסודות האדמה והמתכת, שם החום המר שלו פועל בעוצמה להורדת צ'י ולחות יבשה. בשל תכונות אלו, הוא משמש ברפואה הסינית להקלה על קיפאון והצטברות במערכת העיכול, כמו גם שיעול וצפצופים עקב ליחה החוסמת את הריאות.

מגנוליה אופיסיניאלס הוא עץ נשיר שמקורו בהרים ובעמקים של סצ'ואן, הוביי ומחוזות אחרים בסין. הקליפה הארומטית ביותר המשמשת ברפואה הסינית המסורתית נכרתת מהגבעולים, הענפים והשורשים ונאספת במהלך אפריל עד יוני. הקליפה העבה והחלקה, כבדה בשמן, בעלת צבע סגול בצד הפנימי עם ברק דמוי גביש.

מטפלים עשויים לשקול שילוב של Hou Po עם שמן אתרי Qing Pi כתוספת לתווים עליונים בתערובות שמטרתן לפרק הצטברויות.

פְּרָט
חבילה מותאמת אישית של OEM שמן ריזומה טבעי של מקרוקפלאה

כחומר כימותרפי יעיל, 5-פלואורואורציל (5-FU) נמצא בשימוש נרחב לטיפול בגידולים ממאירים במערכת העיכול, בראש, בצוואר, בחזה ובשחלות. 5-FU היא תרופת הקו הראשון לסרטן המעי הגס והרקטום בקליניקה. מנגנון הפעולה של 5-FU הוא חסימת הטרנספורמציה של חומצת גרעין אורציל לחומצת גרעין תימין בתאי הגידול, ולאחר מכן השפעה על הסינתזה והתיקון של DNA ו-RNA כדי להשיג את האפקט הציטוטוקסי שלו (Afzal et al., 2009; Ducreux et al., 2015; Longley et al., 2003). עם זאת, 5-FU גורם גם לשלשול הנגרם על ידי כימותרפיה (CID), אחת מתופעות הלוואי הנפוצות ביותר המטרידות חולים רבים (Filho et al., 2016). שכיחות השלשול בחולים שטופלו ב-5-FU הייתה עד 50%-80%, דבר שפגע קשות בהתקדמות ויעילות הכימותרפיה (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). כתוצאה מכך, יש חשיבות רבה למציאת טיפול יעיל עבור CID המושרה על ידי 5-FU.

כיום, התערבויות לא תרופתיות והתערבויות תרופתיות הוכנסו לטיפול הקליני ב-CID. התערבויות לא תרופתיות כוללות תזונה סבירה, ותוספי מלח, סוכר וחומרים מזינים אחרים. תרופות כמו לופרמיד ואוקטריאוטיד משמשות בדרך כלל בטיפול נוגד שלשולים ב-CID (Benson et al., 2004). בנוסף, גם תרופות אתנו מאומצות לטיפול ב-CID באמצעות טיפול ייחודי משלהן במדינות שונות. רפואה סינית מסורתית (TCM) היא רפואה אתנו טיפוסית המיושמת כבר יותר מ-2000 שנה במדינות מזרח אסיה, כולל סין, יפן וקוריאה (Qi et al., 2010). ה-TCM טוענת כי תרופות כימותרפיות יגרמו לצריכת צ'י, מחסור בטחול, חוסר הרמוניה בקיבה ולחות אנדופיטית, וכתוצאה מכך לתפקוד לקוי של מערכת ההולכה במעיים. בתאוריית ה-TCM, אסטרטגיית הטיפול ב-CID צריכה להתבסס בעיקר על הוספת צ'י וחיזוק הטחול (Wang et al., 1994).

השורשים היבשים שלאטרקטילודס מקרוספלהקוידז (AM) וג'ינסנג פנאקסCA Mey (PG) הן תרופות צמחיות אופייניות ברפואה הסינית (TCM) עם השפעות דומות של תוספת צ'י וחיזוק הטחול (Li et al., 2014). AM ו-PG משמשים בדרך כלל כזוג צמחי מרפא (הצורה הפשוטה ביותר של תאימות צמחי מרפא סיניים) עם השפעות של תוספת צ'י וחיזוק הטחול לטיפול בשלשולים. לדוגמה, AM ו-PG תועדו בנוסחאות קלאסיות נגד שלשולים כמו Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang מ...Taiping Huimin Heji Ju Fang(שושלת השיר, סין) ובו ז'ונג יי צ'י טאנג מפי ווי לון(שושלת יואן, סין) (איור 1). מספר מחקרים קודמים דיווחו כי כל שלוש הפורמולות בעלות היכולת להקל על CID (Bai et al., 2017; Chen et al., 2019; Gou et al., 2016). בנוסף, המחקר הקודם שלנו הראה כי קפסולת Shenzhu, המכילה רק AM ו-PG, משפיעה באופן פוטנציאלי על טיפולים בשלשולים, קוליטיס (תסמונת שיאקסי) ומחלות גסטרואינטסטינליות אחרות (Feng et al., 2018). עם זאת, אף מחקר לא דן בהשפעה ובמנגנון של AM ו-PG בטיפול ב-CID, בין אם בשילוב ובין אם לחוד.

כיום, המיקרוביוטה של המעיים נחשבת לגורם פוטנציאלי בהבנת המנגנון הטיפולי של הרפואה הסינית (Feng et al., 2019). מחקרים מודרניים מצביעים על כך שמיקרוביוטה של המעיים ממלאת תפקיד מכריע בשמירה על הומאוסטזיס של המעי. מיקרוביוטה בריאה של המעי תורמת להגנה על רירית המעי, מטבוליזם, הומאוסטזיס ותגובה חיסונית, ודיכוי פתוגנים (Thursby and Juge, 2017; Pickard et al., 2017). הפרעה במיקרוביוטה של המעי פוגעת בתפקודים הפיזיולוגיים והחיסוניים של גוף האדם באופן ישיר או עקיף, וגורמת לתגובות לוואי כמו שלשולים (Patel et al., 2016; Zhao and Shen, 2010). מחקרים הראו ש-5-FU שינה באופן משמעותי את מבנה המיקרוביוטה של המעי בעכברים הסובלים משלשולים (Li et al., 2017). לכן, השפעות הבוקר והצהריים על שלשולים המושרים על ידי 5-FU עשויות להיות מתווכות על ידי המיקרוביוטה של המעי. עם זאת, עדיין לא ידוע האם AM ו-PG לבדם ובשילוב יכולים למנוע שלשול המושרה על ידי 5-FU על ידי ויסות מיקרוביוטה של המעי.

על מנת לחקור את ההשפעות נוגדות השלשול ואת המנגנון הבסיסי של AM ו-PG, השתמשנו ב-5-FU כדי לדמות מודל שלשול בעכברים. כאן, התמקדנו בהשפעות הפוטנציאליות של מתן יחיד ומשולב (AP) שלאטרקטילודס מקרוספלהשמן אתרי (AMO) וג'ינסנג פנאקסספונינים כוללים (PGS), הרכיבים הפעילים המופקים בהתאמה מ-AM ו-PG, על שלשולים, פתולוגיה של המעי ומבנה מיקרוביאלי לאחר כימותרפיה עם 5-FU.

פְּרָט
שמן אתרי אקוקומיה פוליאתילן 100% טבעי טהור לטיפוח העור

אוקומיה אולמואידס(EU) (המכונה בדרך כלל "דו ג'ונג" בשפה הסינית) שייכת למשפחת ה-Eucommiaceae, סוג של עץ קטן שמקורו במרכז סין [1צמח זה מעובד באופן נרחב בסין בקנה מידה גדול בשל חשיבותו הרפואית. כ-112 תרכובות בודדו מצמח ה-EU, כולל ליגננים, אירידואידים, פנולים, סטרואידים ותרכובות אחרות. נוסחת צמחי מרפא משלימים של צמח זה (כגון תה טעים) הראתה כמה תכונות רפואיות. לעלה של ה-EU פעילות גבוהה יותר הקשורה לקליפת המוח, הפרח והפרי [2,3דווח כי עלי ה-EU מחזקים את חוזק העצמות ואת שרירי הגוף [4], ובכך מוביל לאריכות ימים ומקדם פוריות אצל בני אדם [5פורמולת תה טעימה העשויה מעלי צמח ה-EU דווחה כמפחיתה שומן ומשפרת את חילוף החומרים האנרגטי. דווח כי תרכובות פלבונואידים (כגון רוטין, חומצה כלורוגנית, חומצה פרולית וחומצה קפאית) מפגינות פעילות נוגדת חמצון בעלי צמח ה-EU [6].

למרות שקיים מספיק ספרות על התכונות הפיטוכימיות של עץ ה-EU, קיימים מעט מחקרים על התכונות הפרמקולוגיות של התרכובות השונות המופקות מקליפות, זרעים, גבעולים ועלים של עץ EU. מאמר סקירה זה יבהיר מידע מפורט בנוגע לתרכובות שונות המופקות מחלקים שונים (קליפות, זרעים, גבעול ועלים) של עץ EU והשימושים הפוטנציאליים של תרכובות אלו בתכונות מקדמות בריאות בעזרת קווי ראיות מדעיים, ובכך יספק חומר עזר ליישום של עץ EU.

פְּרָט
שמן Houttuynia cordata טבעי טהור, שמן Houttuynia Cordata, שמן Lchthammolum

ברוב המדינות המתפתחות, 70-95% מהאוכלוסייה מסתמכת על תרופות מסורתיות לטיפול רפואי ראשוני, ומתוכן 85% משתמשים בצמחים או בתמציות שלהם כחומר פעיל.1החיפוש אחר תרכובות פעילות ביולוגית חדשות מצמחים תלוי בדרך כלל במידע אתני ועממי ספציפי המתקבל מרופאים מקומיים ועדיין נחשב למקור חשוב לגילוי תרופות. בהודו, כ-2000 תרופות הן ממקור צמחי.2לאור העניין הנרחב בשימוש בצמחי מרפא, הסקירה הנוכחית בנושאהוטויניה קורדאטהThunb. מספק מידע עדכני המתייחס למחקרים בוטניים, מסחריים, אתנופארמקולוגיים, פיטוכימיים ופרמקולוגיים המופיעים בספרות.ה. קורדאטהת'ונב שייך למשפחהזאורייםוהוא ידוע בכינויו זנב לטאה סיני. זהו צמח רב שנתי עם קנה שורש סטולוניפרוס בעל שני כימותיפים שונים.3,4הכימותיפ הסיני של המין נמצא בתנאים פראיים וחצי פראיים בצפון מזרח הודו מאפריל עד ספטמבר.5,6,7]ה. קורדאטהזמין בהודו, במיוחד בעמק ברהמפוטרה באסאם, ומשמש באופן מסורתי שבטים שונים באסאם בצורה צמחית וכן למטרות רפואיות שונות.

פְּרָט
יצרן שמן ארקטיום לאפה טהור 100% - שמן ארקטיום לאפה ליים טבעי עם תעודות אבטחת איכות

יתרונות בריאותיים

שורש ברדוק נאכל לעתים קרובות, אך ניתן גם לייבש אותו ולהשרות אותו בתה. הוא משמש היטב כמקור לאינולין,פרה-ביוטיקהסיבים המסייעים לעיכול ומשפרים את בריאות המעיים. בנוסף, שורש זה מכיל פלבנואידים (חומרי הזנה צמחיים),פיטוכימיקלים, ונוגדי חמצון הידועים כבעלי יתרונות בריאותיים.

בנוסף, שורש ברדוק יכול לספק יתרונות נוספים כמו:

להפחית דלקת כרונית

שורש ברדוק מכיל מספר נוגדי חמצון, כגון קוורצטין, חומצות פנוליות ולוטאולין, אשר יכולים לסייע בהגנה על התאים שלך מפני...רדיקלים חופשייםנוגדי חמצון אלה מסייעים בהפחתת דלקות בכל הגוף.

סיכוני בריאות

שורש ברדוק נחשב בטוח לאכילה או לשתייה כתה. עם זאת, צמח זה דומה מאוד לצמחי בלדונה, שהם רעילים. מומלץ לקנות שורש ברדוק רק ממוכרים מהימנים ולהימנע מלקט אותו בעצמכם. בנוסף, יש מידע מינימלי על השפעותיו על ילדים או נשים בהריון. שוחחו עם רופא לפני השימוש בשורש ברדוק עם ילדים או אם את בהריון.

הנה כמה סיכונים בריאותיים אפשריים נוספים שיש לקחת בחשבון בעת שימוש בשורש ברדוק:

התייבשות מוגברת

שורש ברדוק פועל כמו חומר משתן טבעי, מה שעלול להוביל להתייבשות. אם אתם נוטלים כדורי מים או משתנים אחרים, אסור לכם ליטול שורש ברדוק. אם אתם נוטלים תרופות אלו, חשוב להיות מודעים לתרופות, צמחי מרפא ומרכיבים אחרים שעלולים להוביל להתייבשות.

תגובה אלרגית

אם אתם רגישים או שיש לכם היסטוריה של תגובות אלרגיות לחינניות, אמברוסיה או חרציות, אתם נמצאים בסיכון מוגבר לתגובה אלרגית לשורש בורדוק.

פְּרָט
מחיר סיטונאי בתפזורת 100% שמן טהור AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus

מחקרים בבעלי חיים ובמבחנה חקרו את ההשפעות הפוטנציאליות נגד פטריות, נוגדות דלקת וקרדיו-וסקולריות של סספראס ומרכיביו. עם זאת, חסרים ניסויים קליניים, וסספראס אינו נחשב בטוח לשימוש. ספرول, המרכיב העיקרי בקליפת שורש הסספראס ושמןו, נאסר על ידי מנהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA), כולל שימוש כחומר טעם או בושם, ואין להשתמש בו באופן פנימי או חיצוני, מכיוון שהוא עלול להיות מסרטן. ספرول שימש בייצור בלתי חוקי של 3,4-מתילן-דיאוקסימתאמפטמין (MDMA), הידוע גם בשמות הרחוב "אקסטזי" או "מולי", ומכירת ספرول ושמן סספראס מפוקחת על ידי מנהל אכיפת הסמים האמריקאי.

פְּרָט
מחיר סיטונאי בתפזורת 100% שמן אתרי Stellariae Radix טהור (חדש) ארומתרפיה מרגיעה אקליפטוס גלובולוס

הפרמקופיאה הסינית (מהדורת 2020) דורשת שתמצית המתנול של YCH לא תהווה פחות מ-20.0% [2], ללא אינדיקטורים אחרים להערכת איכות שצוינו. תוצאות מחקר זה מראות שתכולת תמציות המתנול של הדגימות הפראיות והמתורבתות עמדה בתקן הפרמקופיאה, ולא היה הבדל משמעותי ביניהן. לכן, לא היה הבדל איכות ניכר בין דגימות פראיות למתורבתות, על פי מדד זה. עם זאת, תכולת הסטרולים הכוללים ופלבנואידים הכוללים בדגימות הפראיות הייתה גבוהה משמעותית מאלה בדגימות המתורבתות. ניתוח מטבולומי נוסף גילה מגוון מטבוליטים רב בין הדגימות הפראיות והמתורבתות. בנוסף, 97 מטבוליטים שונים באופן משמעותי נבחרו, המפורטים בטבלה משלימה S2בין המטבוליטים השונים באופן משמעותי אלה נמצאים β-סיטוסטרול (ID הוא M397T42) ונגזרות קוורצטין (M447T204_2), אשר דווחו כמרכיבים פעילים. מרכיבים שלא דווחו בעבר, כגון טריגונלין (M138T291_2), בטאין (M118T277_2), פוסטין (M269T36), רוטנון (M241T189), ארקטאין (M557T165) וחומצה לוגנית (M399T284_2), נכללו גם הם בין המטבוליטים השונים. רכיבים אלה ממלאים תפקידים שונים בנוגדי חמצון, נוגדי דלקת, סילוק רדיקלים חופשיים, נוגדי סרטן וטיפול בטרשת עורקים, ולכן עשויים להוות מרכיבים פעילים חדשים פוטנציאליים ב-YCH. תכולת המרכיבים הפעילים קובעת את יעילותם ואיכותם של החומרים הרפואיים [7לסיכום, לתמצית מתנול, כמדד הערכת האיכות היחיד של YCH, יש כמה מגבלות, ויש לחקור לעומק סמני איכות ספציפיים יותר. נמצאו הבדלים משמעותיים ברמות הסטרולים הכוללות, בפלבנואידים הכוללים ובתכולתם של מטבוליטים שונים רבים אחרים בין YCH הבר ל-YCH המתורבת; לכן, היו פוטנציאליים כמה הבדלים באיכות ביניהם. יחד עם זאת, למרכיבים הפעילים הפוטנציאליים שהתגלו לאחרונה ב-YCH עשויים להיות ערך ייחוס חשוב לחקר הבסיס התפקודי של YCH ולפיתוח נוסף של משאבי YCH.

חשיבותם של חומרי רפואה מקוריים מוכרת זה מכבר באזור המוצא הספציפי לייצור תרופות צמחיות סיניות באיכות מעולה [8]. איכות גבוהה היא מאפיין חיוני של חומרי רפואה אמיתיים, ובית גידול הוא גורם חשוב המשפיע על איכותם של חומרים כאלה. מאז שהחל השימוש ב-YCH כתרופה, הוא נשלט זה מכבר על ידי YCH פראי. בעקבות ההצגה והביות המוצלחים של YCH בנינגשיה בשנות ה-80, מקור חומרי הרפואה של יינצ'אי-הו עבר בהדרגה מ-YCH פראי ל-YCH מתורבת. על פי חקירה קודמת של מקורות YCH [9] ומחקר השטח של קבוצת המחקר שלנו, ישנם הבדלים משמעותיים באזורי התפוצה של חומרי הרפואה המתורבתים והבריים. ה-YCH הבר מופץ בעיקר באזור האוטונומי נינגשיה הוי במחוז שאאנשי, הסמוך לאזור הצחיח של מונגוליה הפנימית ומרכז נינגשיה. בפרט, ערבות המדבר באזורים אלה הן בית הגידול המתאים ביותר לגידול YCH. לעומת זאת, ה-YCH המתורבת מופץ בעיקר מדרום לאזור התפוצה הבר, כגון מחוז טונגשין (מעובד I) והאזורים הסובבים אותו, שהפך לבסיס הגידול והייצור הגדול ביותר בסין, ומחוז פנג'יאנג (מעובד II), הממוקם באזור דרומי יותר והוא אזור ייצור נוסף עבור YCH מתורבת. יתר על כן, בתי הגידול של שני האזורים המעובדים הנ"ל אינם ערבות מדבר. לכן, בנוסף לאופן הייצור, ישנם גם הבדלים משמעותיים בבית הגידול של ה-YCH הבר והמעובד. בית גידול הוא גורם חשוב המשפיע על איכות חומרי הרפואה הצמחיים. בתי גידול שונים ישפיעו על היווצרות והצטברות של מטבוליטים משניים בצמחים, ובכך ישפיעו על איכות המוצרים הרפואיים [10,11לכן, ההבדלים המשמעותיים בתכולת הפלבנואידים הכוללת והסטרולים הכוללים ובביטוי של 53 המטבוליטים שמצאנו במחקר זה עשויים להיות תוצאה של ניהול שדה והבדלים בבתי גידול.

אחת הדרכים העיקריות בהן הסביבה משפיעה על איכות חומרי הרפואה היא על ידי הפעלת לחץ על צמחי המקור. לחץ סביבתי מתון נוטה לעורר הצטברות של מטבוליטים משניים [12,13]. השערת מאזן הצמיחה/התמיינות קובעת שכאשר יש אספקה מספקת של חומרים מזינים, צמחים בעיקר גדלים, ואילו כאשר יש מחסור בחומרים מזינים, צמחים בעיקר מתמיינים ומייצרים מטבוליטים משניים נוספים [14]. עקת בצורת הנגרמת ממחסור במים היא הלחץ הסביבתי העיקרי שעמו מתמודדים צמחים באזורים צחיחים. במחקר זה, מצב המים של צמח ה-YCH המתורבת שופע יותר, עם רמות משקעים שנתיות גבוהות משמעותית מאלה של צמח ה-YCH הבר (אספקת המים עבור צמח מתורבת I הייתה בערך פי 2 מזו של צמח הבר; צמח מתורבת II הייתה בערך פי 3.5 מזו של צמח הבר). בנוסף, האדמה בסביבה הפראית היא אדמת חול, אך האדמה באדמות חקלאיות היא אדמת חרסית. בהשוואה לקרקע חולית, לקרקע חולית יש יכולת אגירת מים ירודה והיא נוטה יותר להחמיר את עקת הבצורת. יחד עם זאת, תהליך הגידול לווה לעתים קרובות בהשקיה, כך שרמת עקת הבצורת הייתה נמוכה. צמח ה-YCH הבר גדל בבתי גידול טבעיים קשים וצחיחים, ולכן הוא עלול לסבול מעקת בצורת חמורה יותר.

אוסמורגולציה היא מנגנון פיזיולוגי חשוב שבאמצעותו צמחים מתמודדים עם עקת בצורת, ואלקלואידים הם מווסתי אוסמוטיים חשובים בצמחים גבוהים יותר.15בטאין הם תרכובות אמוניום רביעוניות אלקלואידיות מסיסות במים ויכולות לשמש כמגן אוסמוטי. עקת בצורת יכולה להפחית את הפוטנציאל האוסמוטי של תאים, בעוד שאוסמו-פרוטקטים משמרים ומתחזקים את המבנה והשלמות של מקרומולקולות ביולוגיות, ומקלים ביעילות על הנזק הנגרם על ידי עקת בצורת לצמחים [16לדוגמה, תחת עקת בצורת, תכולת הבטאין של סלק סוכר ו- Lycium barbarum עלתה משמעותית [17,18טריגונלין הוא מווסת צמיחת תאים, ובעיית בצורת, הוא יכול להאריך את מחזור תאי הצמח, לעכב את צמיחת התאים ולהוביל להתכווצות נפח התא. העלייה היחסית בריכוז המומסים בתא מאפשרת לצמח להשיג ויסות אוסמוטי ולשפר את יכולתו לעמוד בעיית בצורת [19]. JIA X [20] מצאו כי עם עלייה בעקה הבצורת, אסטרגלוס ממברנאצ'וס (מקור לרפואה הסינית המסורתית) ייצר יותר טריגונלין, הפועל לוויסות הפוטנציאל האוסמוטי ולשיפור היכולת לעמוד בעקה הבצורת. פלבנואידים הוכחו גם כבעלי תפקיד חשוב בעמידות הצמחים לעקה הבצורת [21,22מספר רב של מחקרים אישרו כי עקת בצורת מתונה תרמה להצטברות פלבנואידים. לאנג דואו-יונג ואחרים. [23] השוו את השפעות עקת הבצורת על YCH על ידי שליטה ביכולת אחסון המים בשדה. נמצא כי עקת הבצורת עיכבה את צמיחת השורשים במידה מסוימת, אך בעקת בצורת בינונית וחמורה (40% מיכולת אחסון המים בשדה), תכולת הפלבנואידים הכוללת ב-YCH עלתה. בינתיים, תחת עקת בצורת, פיטוסטרולים יכולים לפעול לוויסות נזילות וחדירות קרום התא, לעכב אובדן מים ולשפר את עמידות הלחץ [24,25לכן, ההצטברות המוגברת של פלבנואידים כוללים, סטרולים כוללים, בטאין, טריגונלין ומטבוליטים משניים אחרים ב-YCH בטבע עשויה להיות קשורה לעקה בצורת בעצימות גבוהה.

במחקר זה, בוצע ניתוח העשרה של מסלול KEGG על המטבוליטים שנמצאו כשונים משמעותית בין YCH בטבע לבין YCH בתרבות. המטבוליטים המועשרים כללו כאלה המעורבים במסלולי מטבוליזם של אסקורבט ואלדראט, ביוסינתזה של אמינואציל-tRNA, מטבוליזם של היסטידין ומטבוליזם של בטא-אלנין. מסלולים מטבוליים אלה קשורים קשר הדוק למנגנוני עמידות ללחץ בצמחים. ביניהם, מטבוליזם של אסקורבט ממלא תפקיד חשוב בייצור נוגדי חמצון בצמחים, מטבוליזם של פחמן וחנקן, עמידות ללחץ ותפקודים פיזיולוגיים אחרים [26ביוסינתזה של אמינואציל-tRNA היא מסלול חשוב ליצירת חלבונים [27,28], אשר מעורב בסינתזה של חלבונים עמידים ללחץ. גם מסלולי היסטידין וגם מסלולי β-אלנין יכולים לשפר את הסבילות של הצמח ללחץ סביבתי [29,30]. זה מצביע עוד על כך שההבדלים במטבוליטים בין YCH הבר לתרבותי היו קשורים קשר הדוק לתהליכי עמידות ללחץ.

אדמה היא הבסיס החומרי לצמיחה והתפתחות של צמחי מרפא. חנקן (N), זרחן (P) ואשלגן (K) בקרקע הם יסודות תזונתיים חשובים לצמיחה והתפתחות של צמחים. חומר אורגני בקרקע מכיל גם N, P, K, Zn, Ca, Mg ומקרו-יסודות ויסודות קורט אחרים הדרושים לצמחי מרפא. עודף או מחסור בחומרים מזינים, או יחסים לא מאוזנים של חומרי הזנה, ישפיעו על הצמיחה וההתפתחות ועל איכות החומרים הרפואיים, ולצמחים שונים יש דרישות תזונתיות שונות.31,32,33לדוגמה, עקה נמוכה של חנקן קידמה את הסינתזה של אלקלואידים ב-Isatis indigotica, והייתה מועילה להצטברות פלבנואידים בצמחים כגון Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge ו-Dichondra repens Forst. לעומת זאת, יותר מדי חנקן עיכב את הצטברות הפלבנואידים במינים כגון Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis ו-Ginkgo biloba, והשפיע על איכות החומרים הרפואיים [34]. יישום דשן P היה יעיל בהגדלת תכולת חומצה גליצריזית ודיהידרואצטון בליקריץ אורלי [35כאשר כמות היישום עלתה על 0.12 ק"ג.מ"ר, תכולת הפלבנואידים הכוללת ב-Tussilago farfara ירדה [36ליישום דשן P הייתה השפעה שלילית על תכולת הפוליסכרידים בצמח rhizoma polygonati, צמח מהרפואה הסינית המסורתית [37], אך דשן K היה יעיל בהגדלת תכולת הספונינים בו [38]. מריחת דשן בריכוז 450 ק"ג·ק"מ−2 K הייתה הטובה ביותר לצמיחה וצבירת ספונינים של פנאקס נוטוג'ינסנג בן שנתיים [39]. תחת יחס של N:P:K = 2:2:1, הכמויות הכוללות של תמצית הידרותרמית, הרפגיד והרפגוזיד היו הגבוהות ביותר [40]. היחס הגבוה של חנקן, פסור וקל היה מועיל לקידום הצמיחה של פוגוסטמון קבלין ולהגדלת תכולת השמן הנדיף. יחס נמוך של חנקן, פסור וקל הגביר את תכולת המרכיבים היעילים העיקריים של שמן עלי גבעול פוגוסטמון קבלין [41]. YCH הוא צמח עמיד לאדמה צחיחה, וייתכן שיש לו דרישות ספציפיות לחומרי הזנה כגון N, P ו-K. במחקר זה, בהשוואה ל-YCH המתורבת, אדמת צמחי ה-YCH הבר הייתה יחסית צחיחה: תכולת החומר האורגני, סך ה-N, סך ה-P וסה"כ ה-K בקרקע הייתה כ-1/10, 1/2, 1/3 ו-1/3 מזו של הצמחים המתורבתים, בהתאמה. לכן, ההבדלים בחומרי הזנה בקרקע עשויים להיות סיבה נוספת להבדלים בין המטבוליטים שזוהו ב-YCH המתורבת והבראי. Weibao Ma et al. [42] מצא כי יישום כמות מסוימת של דשן חנקן ודשן פובר שיפר משמעותית את היבול ואיכות הזרעים. עם זאת, השפעת יסודות התזונה על איכות ה-YCH אינה ברורה, ויש צורך במחקר נוסף על אמצעי דישון לשיפור איכות החומרים הרפואיים.

לתרופות צמחיות סיניות יש מאפיינים של "בתי גידול נוחים מקדמים את היבול, ובתי גידול לא טובים משפרים את האיכות"43בתהליך של מעבר הדרגתי מצמח YCH פראי לצמח מעובד, בית הגידול של הצמחים השתנה מערבת מדבר צחיחה וצחיחה לאדמות חקלאיות פוריות עם שפע מים רב יותר. בית הגידול של ה-YCH המעובד עדיף והיבול גבוה יותר, דבר המסייע לענות על דרישת השוק. עם זאת, בית גידול עדיף זה הוביל לשינויים משמעותיים במטבוליטים של YCH; האם זה תורם לשיפור איכות ה-YCH וכיצד להשיג ייצור איכותי של YCH באמצעות אמצעי גידול מבוססי מדע ידרוש מחקר נוסף.

גידול בית גידול סימולטיבי הוא שיטה לסימולציה של תנאי בית הגידול והסביבה של צמחי מרפא פראיים, המבוססת על ידע על הסתגלות ארוכת טווח של צמחים ללחצים סביבתיים ספציפיים.43על ידי סימולציה של גורמים סביבתיים שונים המשפיעים על צמחי הבר, ובמיוחד על בית הגידול המקורי של צמחים המשמשים כמקורות לחומרי מרפא אותנטיים, הגישה משתמשת בתכנון מדעי ובהתערבות אנושית חדשנית כדי לאזן את הצמיחה והמטבוליזם המשני של צמחי מרפא סיניים [43]. השיטה שואפת להשיג את הסידורים האופטימליים לפיתוח חומרים רפואיים באיכות גבוהה. גידול בית גידול סימולטיבי אמור לספק דרך יעילה לייצור איכותי של YCH גם כאשר הבסיס הפרמקודינמי, סמני האיכות ומנגנוני התגובה לגורמים סביבתיים אינם ברורים. בהתאם לכך, אנו מציעים כי תכנון מדעי ואמצעי ניהול שדה בגידול וייצור YCH יבוצעו תוך התייחסות למאפיינים הסביבתיים של YCH בר, כגון תנאי קרקע צחיחים, שוממים וחוליים. במקביל, יש לקוות גם כי חוקרים יבצעו מחקר מעמיק יותר על בסיס החומר הפונקציונלי וסמני האיכות של YCH. מחקרים אלה יכולים לספק קריטריונים יעילים יותר להערכה עבור YCH, ולקדם ייצור איכותי ופיתוח בר-קיימא של התעשייה.

פְּרָט
שמן צמחי פרוקטוס אמומי מפזרי עיסוי טבעיים 1 ק"ג בתפזורת שמן אתרי אמומי וילוסום

משפחת הזינגיבראסיים משכה תשומת לב גוברת במחקר אללופתי בגלל השמנים הנדיפים העשירים והארומטיות של המינים החברים בה. מחקרים קודמים הראו כי הכימיקלים מכורכום זדואריה (Curcuma zedoaria) [40], אלפיניה זרומבט (פרס.) BLBurtt & RMSm. [41] ו-Zingiber officinale Rosc. [42] ממשפחת הג'ינג'ר משפיעים באופן אללופתי על נביטת זרעים וצמיחת שתילים של תירס, חסה ועגבנייה. המחקר הנוכחי שלנו הוא הדיווח הראשון על הפעילות האללופתית של חומרים נדיפים מגבעולים, עלים ופירות צעירים של A. villosum (חבר במשפחת Zingiberaceae). תפוקת השמן של גבעולים, עלים ופירות צעירים הייתה 0.15%, 0.40% ו-0.50% בהתאמה, דבר המצביע על כך שפירות ייצרו כמות גדולה יותר של שמנים נדיפים מאשר גבעולים ועלים. המרכיבים העיקריים של שמנים נדיפים מגבעולים היו β-פינן, β-פלנדרן ו-α-פינן, דפוס דומה לזה של הכימיקלים העיקריים של שמן עלים, β-פינן ו-α-פינן (פחמימנים מונוטרפן). מצד שני, השמן בפירות צעירים היה עשיר בבורניל אצטט וקמפור (מונוטרפנים מחומצנים). התוצאות נתמכו על ידי ממצאיו של דו נ דאי [30,32] והוי אאו [31] אשר זיהו את השמנים מאיברים שונים של A. villosum.

פורסמו מספר דיווחים על פעילותם של תרכובות עיקריות אלו במינים אחרים המעכבת את צמיחת הצמחים. שאלנדר קאור מצא כי α-פינן מאקליפטוס דיכא באופן בולט את אורך השורש וגובה הנצרים של Amaranthus viridis L. בריכוז של 1.0 מיקרוליטר [43], ומחקר נוסף הראה כי α-פינן עיכב צמיחה מוקדמת של שורשים וגרם נזק חמצוני ברקמת השורש באמצעות יצירה מוגברת של מיני חמצן ריאקטיביים [44]. מספר דיווחים טענו כי β-פינן עיכב נביטה וצמיחת שתילים של עשבים שוטים בניסוי באופן תלוי מינון על ידי שיבוש שלמות הממברנה [45], שינוי הביוכימיה של הצמח ושיפור פעילותם של פראוקסידאזות ופוליפנול אוקסידאזות [46β-פלנדרן הראה עיכוב מקסימלי לנביטה ולצמיחה של Vigna unguiculata (L.) Walp בריכוז של 600 ppm [47], בעוד שבריכוז של 250 מ"ג/מ"ק, קמפור דיכא את צמיחת הרדיקלים והנצרים של Lepidium sativum L. [48]. עם זאת, מחקרים המדווחים על ההשפעה האללופתית של בורניל אצטט הם מועטים. במחקר שלנו, ההשפעות האללופתיות של β-פינן, בורניל אצטט וקמפור על אורך השורש היו חלשות יותר מאשר עבור שמנים נדיפים למעט α-פינן, בעוד ששמן עלים, עשיר ב-α-פינן, היה גם פיטוטוקסי יותר מהשמנים הנדיפים המתאימים מגבעולים ופירות של A. villosum, שני ממצאים המצביעים על כך ש-α-פינן עשוי להיות הכימיקל החשוב לאללופתיה על ידי מין זה. יחד עם זאת, התוצאות רמזו גם שכמה תרכובות בשמן הפרי שלא היו בשפע עשויות לתרום להפקת ההשפעה הפיטוטוקסית, ממצא הדורש מחקר נוסף בעתיד.

בתנאים רגילים, ההשפעה האללופתית של אללוכימיקלים היא ספציפית למין. ג'יאנג ועמיתיו מצאו ששמן אתרי המיוצר על ידי Artemisia sieversiana הפעיל השפעה חזקה יותר על Amaranthus retroflexus L. מאשר על Medicago sativa L., Poa annua L., ו-Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng.49במחקר אחר, שמן נדיף של Lavandula angustifolia Mill. יצר דרגות שונות של השפעות פיטוטוקסיות על מיני צמחים שונים. Lolium multiflorum Lam. היה מין הקולט הרגיש ביותר, כאשר צמיחת ההיפוקוטיל והרדיקול עוכבה ב-87.8% ו-76.7%, בהתאמה, במינון של 1 מיקרוליטר/מ"ל שמן, אך צמיחת ההיפוקוטיל של שתילי המלפפון כמעט ולא הושפעה [20תוצאותינו הראו גם כי היה הבדל ברגישות לחומרים נדיפים של A. villosum בין L. sativa ו-L. perenne.

תרכובות נדיפות ושמנים אתריים מאותו מין יכולים להשתנות כמותית ו/או איכותית עקב תנאי גידול, חלקי צמח ושיטות גילוי. לדוגמה, דו"ח הראה כי פירנואיד (10.3%) ו-β-קריופילן (6.6%) היו התרכובות העיקריות של החומרים הנדיפים הנפלטים מעלי הסמבוקוס ניגרה, בעוד שבנזאלדהיד (17.8%), α-בולנסן (16.6%) וטטרקוזן (11.5%) היו בשפע בשמנים המופקים מעלים [50במחקר שלנו, לתרכובות נדיפות ששוחררו מחומרי הצמח הטריים היו השפעות אללופתיות חזקות יותר על צמחי הבדיקה בהשוואה לשמנים הנדיפים שחולצו, כאשר ההבדלים בתגובה קשורים קשר הדוק להבדלים באללוכימיקלים הקיימים בשני התכשירים. יש לחקור לעומק את ההבדלים המדויקים בין תרכובות נדיפות לשמנים בניסויים הבאים.

הבדלים במגוון המיקרוביאלי ובמבנה הקהילה המיקרוביאלית בדגימות קרקע אליהן נוספו שמנים נדיפים היו קשורים לתחרות בין מיקרואורגניזמים, כמו גם לכל השפעה רעילה ומשך הזמן של שמנים נדיפים בקרקע. ווקו וליוטירי [51] מצא כי מריחה של ארבעה שמנים אתריים (0.1 מ"ל) על אדמה מעובדת (150 גרם) הפעילה את הנשימה של דגימות הקרקע, אפילו השמנים היו שונים בהרכב הכימי שלהם, דבר המצביע על כך ששמני צמחים משמשים כמקור פחמן ואנרגיה על ידי מיקרואורגניזמים הקיימים בקרקע. נתונים שהתקבלו מהמחקר הנוכחי אישרו כי השמנים מכל הצמח A. villosum תרמו לעלייה הברורה במספר מיני פטריות הקרקע עד היום ה-14 לאחר הוספת השמן, דבר המצביע על כך שהשמן עשוי לספק את מקור הפחמן לפטריות קרקע נוספות. מחקר נוסף דיווח על ממצא: מיקרואורגניזמים בקרקע החזירו את תפקודם הראשוני ואת הביומסה שלהם לאחר תקופה זמנית של וריאציה שנגרמה על ידי הוספת שמן Thymbra capitata L. (Cav), אך השמן במינון הגבוה ביותר (0.93 מיקרוליטר שמן לגרם אדמה) לא אפשר למיקרואורגניזמים בקרקע לשחזר את הפונקציונליות הראשונית [52]. במחקר הנוכחי, בהתבסס על ניתוח מיקרוביולוגי של הקרקע לאחר טיפול בימים וריכוזים שונים, שיערנו כי קהילת חיידקי הקרקע תתאושש לאחר ימים נוספים. לעומת זאת, המיקרוביוטה הפטרייתית אינה יכולה לחזור למצבה המקורי. התוצאות הבאות מאשרות השערה זו: ההשפעה הברורה של ריכוז גבוה של השמן על הרכב המיקרוביום הפטרייתי בקרקע נחשפה על ידי ניתוח קואורדינטות עיקריות (PCoA), והצגת מפת החום אישרה שוב כי הרכב קהילות הפטרייה של הקרקע שטופלה ב-3.0 מ"ג/מ"ל שמן (כלומר 0.375 מ"ג שמן לגרם אדמה) ברמת הסוג שונה במידה ניכרת מהטיפולים האחרים. נכון לעכשיו, המחקר על השפעות הוספת פחמימנים מונוטרפנים או מונוטרפנים מחומצנים על מגוון המיקרוביאלים בקרקע ומבנה הקהילה עדיין נדיר. מספר מחקרים דיווחו כי α-פינן הגביר את הפעילות המיקרוביאלית בקרקע ואת השפע היחסי של Methylophilaceae (קבוצת מתילוטרופים, Proteobacteria) תחת תכולת לחות נמוכה, וממלא תפקיד חשוב כמקור פחמן בקרקעות יבשות יותר [53באופן דומה, שמן נדיף של צמח שלם של A. villosum, המכיל 15.03% α-פינן (טבלה משלימה S1), הגדילה באופן ברור את השפע היחסי של פרוטאובקטריה ב-1.5 מ"ג/מ"ל ו-3.0 מ"ג/מ"ל, דבר המצביע על כך ש-α-פינן עשוי לשמש כאחד ממקורות הפחמן עבור מיקרואורגניזמים בקרקע.

לתרכובות הנדיפות שנוצרו על ידי איברים שונים של A. villosum היו דרגות שונות של השפעות אללופתיות על L. sativa ו-L. perenne, דבר שהיה קשור קשר הדוק למרכיבים הכימיים שחלקי הצמח A. villosum הכילו. למרות שההרכב הכימי של השמן הנדיף אושר, התרכובות הנדיפות ששחרר A. villosum בטמפרטורת החדר אינן ידועות, ויש צורך בחקירה נוספת. יתר על כן, ההשפעה הסינרגטית בין חומרים אללוכימיים שונים ראויה גם היא לשיקול דעת. מבחינת מיקרואורגניזמים בקרקע, כדי לחקור את השפעת השמן הנדיף על מיקרואורגניזמים בקרקע באופן מקיף, עדיין עלינו לערוך מחקר מעמיק יותר: להאריך את זמן הטיפול בשמן הנדיף ולהבחין בשינויים בהרכב הכימי של השמן הנדיף בקרקע בימים שונים.

פְּרָט
שמן ארטמיסיה קפילריס טהור לייצור נרות וסבון, שמן אתרי מפזר סיטונאי חדש למפזרי מבער ריד

עיצוב מודל מכרסם

בעלי החיים חולקו באופן אקראי לחמש קבוצות של חמישה עשר עכברים כל אחת. קבוצת הביקורת וקבוצת המודל עכברים קיבלו זרעי תה.שמן שומשוםבמשך 6 ימים. עכברים בקבוצת ביקורת חיובית קיבלו טבליות ביפנדאט (BT, 10 מ"ג/ק"ג) דרך הפה למשך 6 ימים. קבוצות הניסוי טופלו ב-100 מ"ג/ק"ג ו-50 מ"ג/ק"ג AEO מומס בשמן שומשום למשך 6 ימים. ביום 6, קבוצת הביקורת טופלה בשמן שומשום, וכל שאר הקבוצות טופלו במינון יחיד של 0.2% CCl4 בשמן שומשום (10 מ"ל/ק"ג) על ידיהזרקה תוך-צפקיתלאחר מכן העכברים צומו ללא מים, ודגימות דם נאספו מכלי הדם הרטרובולבריים; הדם שנאסף סורכז במהירות של 3000 ×.gלמשך 10 דקות כדי להפריד את הסרום.פריקה צוואריתבוצע מיד לאחר נטילת הדם, ודגימות הכבד הוצאו מיד. חלק אחד מדגימת הכבד אוחסן מיד ב-20 מעלות צלזיוס עד לניתוח, וחלק אחר נכרת וקיבע ב-10%פורמליןתמיסה; הרקמות הנותרות אוחסנו ב-80 מעלות צלזיוס לניתוח היסטופתולוגי (וואנג ואחרים, 2008,הסו ואחרים, 2009,ני ואחרים, 2015).

מדידת הפרמטרים הביוכימיים בסרום

פגיעה בכבד הוערכה על ידי הערכת ה-פעילויות אנזימטיותשל ALT ו-AST בסרום באמצעות ערכות מסחריות מתאימות בהתאם להוראות לערכות (נאנג'ינג, מחוז ג'יאנגסו, סין). הפעילות האנזימטית בוטאה כיחידות לליטר (U/l).

מדידת MDA, SOD, GSH ו-GSH-Pxבהומוגנטים של הכבד

רקמות הכבד עברו הומוגניזציה עם תמיסת מלח פיזיולוגית קרה ביחס של 1:9 (משקל/נפח, כבד:תמיסת מלח). ההומוגנטים עברו צנטריפוגה (2500 ×gלמשך 10 דקות) כדי לאסוף את הנוזלים העל-גופניים לצורך הקביעות הבאות. נזק לכבד הוערך לפי מדידות הכבד של רמות MDA ו-GSH וכן של SOD ו-GSH-P.xפעילויות. כל אלה נקבעו בהתאם להוראות שעל הערכה (נאנג'ינג, מחוז ג'יאנגסו, סין). התוצאות עבור MDA ו-GSH באו לידי ביטוי כ-nmol למ"ג חלבון (nmol/mg protein), ופעילויות SOD ו-GSH-P באו לידי ביטויxבאו לידי ביטוי כ-U למ"ג חלבון (U/mg prot).

ניתוח היסטופתולוגי

מנות של כבד טרי קובעו במיכל בופר 10%פאראפורמלדהידתמיסת פוספט. לאחר מכן הדגימה הוטבעה בפרפין, נחתכה לחתכים של 3-5 מיקרומטר, נצבעה בהמטוקסיליןואאוזין(H&E) לפי נוהל סטנדרטי, ולבסוף נותח על ידימיקרוסקופיית אור(טיאן ואחרים, 2012).

ניתוח סטטיסטי

התוצאות בוצעו כממוצע ± סטיית תקן (SD). התוצאות נותחו באמצעות תוכנת SPSS Statistics, גרסה 19.0. הנתונים עברו ניתוח שונות (ANOVA,p< 0.05) ולאחר מכן מבחן דנט ומבחן T3 של דנט כדי לקבוע את ההבדלים המובהקים סטטיסטית בין הערכים של קבוצות הניסוי השונות. הבדל מובהק נחשב ברמה שלp< 0.05.

תוצאות ודיון

מרכיבי AEO

בניתוח GC/MS, נמצא כי ה-AEO מכיל 25 מרכיבים שעברו שחרור תוך 10 עד 35 דקות, וזוהו 21 מרכיבים המהווים 84% מהשמן האתרי (טבלה 1). השמן הנדיף הכילמונוטרפנואידים(80.9%), ססקיטרפנואידים (9.5%), פחמימנים רוויים בלתי מסועפים (4.86%) ואצטילן מגוון (4.86%). בהשוואה למחקרים אחרים (גואו ואחרים, 2004), מצאנו מונוטרפנואידים בשפע (80.90%) ב-AEO. התוצאות הראו שהמרכיב הנפוץ ביותר של AEO הוא β-ציטרונלול (16.23%). רכיבים עיקריים אחרים של AEO כוללים 1,8-צינול (13.9%),קַמפוֹר(12.59%),לינלול(11.33%), α-pinene (7.21%), β-pinene (3.99%),תימול(3.22%), ו-מירסן(2.02%). השונות בהרכב הכימי עשויה להיות קשורה לתנאי הסביבה אליהם נחשף הצמח, כגון מים מינרליים, אור שמש, שלב ההתפתחות ו...תְזוּנָה.

פְּרָט
שמן טהור Saposhnikovia divaricata לייצור נרות וסבון, שמן אתרי מפזר סיטונאי חדש למפזרי מבער ריד

2.1. הכנת SDE

קני השורש של SD נרכשו כצמח מיובש מחברת Hanherb Co. (גורי, קוריאה). חומרי הצמח אושרו טקסונומית על ידי ד"ר גו-יה צ'וי מהמכון הקוריאני לרפואה מזרחית (KIOM). דגימת שובר (מספר 2014 SDE-6) הופקדה בעשבייה הקוריאנית של משאבי צמחים סטנדרטיים. קני שורש מיובשים של SD (320 גרם) חולצו פעמיים עם אתנול 70% (עם רפלוקס של שעתיים) והתמצית רוכזה לאחר מכן תחת לחץ מופחת. המרתח סונן, עבר ליופיליזציה ואוחסן ב-4 מעלות צלזיוס. תפוקת התמצית המיובשת מחומרי המוצא הגולמיים הייתה 48.13% (משקל/משקל).

2.2. ניתוח כמותי של כרומטוגרפיית נוזלים בעלת ביצועים גבוהים (HPLC)

ניתוח כרומטוגרפי בוצע באמצעות מערכת HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) וגלאי מערך פוטודיודה. לצורך ניתוח HPLC של SDE, ה-prim-Oתקן גלוקוזילצימיפוגין נרכש מהמכון הקוריאני לקידום תעשיית הרפואה המסורתית (גיונגסאן, קוריאה), ו-שניות O-גלוקוזילהמאודול ו-4′-O-β-D-גלוקוזיל-5-Oβ-מתילוויסאמינול בודדו במעבדה שלנו וזוהו באמצעות אנליזות ספקטרליות, בעיקר באמצעות NMR ו-MS.

דגימות SDE (0.1 מ"ג) הומסו באתנול 70% (10 מ"ל). הפרדה כרומטוגרפית בוצעה באמצעות עמודה XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 מ"מ, 5μm, Waters Co., מילפורד, מסצ'וסטס, ארה"ב). הפאזה הניידת הורכבה מאצטוניטריל (A) ו-0.1% חומצה אצטית במים (B) בקצב זרימה של 1.0 מ"ל/דקה. נעשה שימוש בתוכנית גרדיאנט רב-שלבית כדלקמן: 5% A (0 דקות), 5-20% A (0-10 דקות), 20% A (10-23 דקות) ו-20-65% A (23-40 דקות). אורך הגל של הגילוי נסרק ב-210-400 ננומטר ונרשם ב-254 ננומטר. נפח ההזרקה היה 10.0μL. תמיסות סטנדרטיות לקביעת שלושה כרומונים הוכנו בריכוז סופי של 7.781 מ"ג/מ"ל (prim-O-גלוקוזילצימיפוגין), 31.125 מ"ג/מ"ל (4′-O-β-D-גלוקוזיל-5-O-מתילוויסאמינול), ו-31.125 מ"ג/מ"ל (שניות O-גלוקוזילהמאודול) במתנול ונשמר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

2.3. הערכת פעילות אנטי-דלקתיתבַּמַבחֵנָה

2.3.1. תרבית תאים וטיפול בדגימה

תאי RAW 264.7 התקבלו מאוסף American Type Culture (ATCC, Manassas, VA, USA) וגודלו במדיום DMEM המכיל 1% אנטיביוטיקה ו-5.5% FBS. התאים הודגרו באווירה לחה של 5% CO2 ב-37°C. כדי לעורר את התאים, המדיום הוחלף במדיום DMEM טרי, וליפופוליסכריד (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ב-1μגרם/מ"ל נוסף בנוכחות או בהיעדר SDE (200 או 400μגרם/מ"ל) למשך 24 שעות נוספות.

2.3.2. קביעת תחמוצת החנקן (NO), פרוסטגלנדין E2 (PGE2), גורם נמק גידולי-α(TNF-α), וייצור אינטרלוקין-6 (IL-6)

תאים טופלו ב-SDE ועברו גירוי ב-LPS למשך 24 שעות. ייצור NO נותח על ידי מדידת ניטריט באמצעות ריאגנט Griess לפי מחקר קודם [12הפרשת הציטוקינים הדלקתיים PGE2, TNF-α, ו-IL-6 נקבע באמצעות ערכת ELISA (מערכות R&D) בהתאם להוראות היצרן. השפעות ה-SDE על ייצור NO וציטוקינים נקבעו ב-540 ננומטר או 450 ננומטר באמצעות Wallac EnVision.™קורא מיקרו-צלחות (פרקין אלמר).

2.4. הערכת פעילות אנטי-אוסטאוארתריטיסבגוף חי

2.4.1. בעלי חיים

חולדות ספראג-דאולי זכריות (בנות 7 שבועות) נרכשו מחברת Samtako Inc. (אוסאן, קוריאה) ושוכנו בתנאים מבוקרים עם מחזור אור/חושך של 12 שעות ב...מעלות צלזיוס ו% לחות. חולדות קיבלו תזונה מעבדתית ומיםכרצונךכל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) ואושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת דאג'ון (דאג'ון, הרפובליקה של קוריאה).

2.4.2. אינדוקציה של OA עם MIA בחולדות

בעלי החיים חולקו באופן אקראי וחולקו לקבוצות טיפול לפני תחילת המחקר (לכל קבוצה). תמיסת MIA (3 מ"ג/50μליטר של תמיסת מלח 0.9%) הוזרק ישירות לחלל התוך-מפרקי של הברך הימנית תחת הרדמה המושרת על ידי תערובת של קטמין וקסילזין. החולדות חולקו באופן אקראי לארבע קבוצות: (1) קבוצת התמיסה ללא הזרקת MIA, (2) קבוצת ה-MIA עם הזרקת MIA, (3) קבוצת ה-SDE שטופלה (200 מ"ג/ק"ג) עם הזרקת MIA, ו-(4) קבוצת ה-indomethacin (IM-) שטופלה (2 מ"ג/ק"ג) עם הזרקת MIA. החולדות קיבלו SDE ו-IM דרך הפה שבוע לפני הזרקת MIA למשך 4 שבועות. מינון ה-SDE וה-IM ששימש במחקר זה התבסס על אלו ששימשו במחקרים קודמים [10,13,14].

2.4.3. מדידות של פיזור נשיאת משקל בכפות האחוריות

לאחר אינדוקציה של OA, הופרע האיזון המקורי ביכולת נשיאת המשקל של הכפות האחוריות. בודק אי-יכולת (Linton Instrumentation, Norfolk, UK) שימש להערכת שינויים בסבילות נשיאת המשקל. החולדות הוכנסו בזהירות לתא המדידה. ממוצע כוח נשיאת המשקל שהפעילה הגפה האחורית נמדד על פני 3 שניות. יחס התפלגות המשקל חושב לפי המשוואה הבאה: [משקל על הגפה האחורית הימנית/(משקל על הגפה האחורית הימנית + משקל על הגפה האחורית השמאלית)] × 100 [15].

2.4.4. מדידות של רמות ציטוקינים בסרום

דגימות הדם עברו צנטריפוגה ב-1,500 גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס; לאחר מכן נאסף הסרום ואוחסן ב-70 מעלות צלזיוס עד לשימוש. רמות ה-IL-1β, IL-6, TNF-α, ו-PGE2 בסרום נמדדו באמצעות ערכות ELISA של R&D Systems (מיניאפוליס, מינסוטה, ארה"ב) בהתאם להוראות היצרן.

2.4.5. ניתוח כמותי RT-PCR בזמן אמת

RNA כולל חולץ מרקמת מפרק הברך באמצעות ריאגנט TRI® (Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב), תועתק לאחור ל-cDNA והוגבר באמצעות PCR באמצעות ערכת TM One Step RT PCR עם ירוק SYBR (Applied Biosystems, גרנד איילנד, ניו יורק, ארה"ב). PCR כמותי בזמן אמת בוצע באמצעות מערכת Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, גרנד איילנד, ניו יורק, ארה"ב). רצפי הפריימרים ורצף הפרובים מוצגים בטבלה.1מנות קטנות של cDNA לדוגמה וכמות שווה של cDNA של GAPDH הוגברו באמצעות תערובת אב TaqMan® Universal PCR המכילה DNA פולימראז בהתאם להוראות היצרן (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). תנאי ה-PCR היו 2 דקות ב-50°C, 10 דקות ב-94°C, 15 שניות ב-95°C ודקה אחת ב-60°C למשך 40 מחזורים. ריכוז גן המטרה נקבע באמצעות שיטת Ct ההשוואתית (מספר מחזורי סף בנקודת החיתוך בין עלילת ההגברה לסף), בהתאם להוראות היצרן.

פְּרָט